毛细管区带电泳法分离四种蛋白质的研究.pdfVIP

现代仪器(www．moderninstrs．org．cn) ll| _ _ 毛细管区带电泳法分离四种蛋白质的研究 黄莉莉 蔡怀鸿 洪爱华 梁志红 。 (1．广州暨南大学生命科学技术学院化学系 广州 510632) (2．广州暨南大学生命科学技术学院分析测试中心 广州 510632) 摘 要 采用毛细管电泳在较为极端的pH条件下对4种混合蛋白质进行分离，建立一 种简单、高效、快速同时测定酸碱性蛋 白质的方法。结果表明，在pH2和pH9的缓冲 体系中混合蛋白质能够有效分离，添加改性剂SDS可提高分离效率。 关键词 毛细管电泳 蛋白质 糖蛋 白 分离 蛋 白质是一类重要的生物大分子，蛋白质的分 O【一淀粉酶、溶菌酶、转铁蛋白、十二烷基硫 离分析是蛋白质组学、生化及临床医学等研究领域 酸钠 (SDS)(Sigma)；牛血清白蛋 白 (上海伯奥生物 的重要 内容。毛细管电泳兼有普通 电泳和色谱的双 科技有限公司)；柠檬酸 ／MES(吗啡啉乙磺酸)缓 重优点，分离效率高、速度快、易于 自动化，在蛋 冲液，pH6．0 (Beckman-Coulter公司，美国)；硼酸、 白质分离检测方面发挥重要作用，其中区带电泳操 硼酸钠、磷酸 (广州化学试剂厂，分析纯)；所用 作简便、运行成本低、适用性广，是最普遍采用的 蒸馏水为Millipor纯水。 分离模式。但在分析过程中，蛋白质容易在毛细管 1．2 实验方法 内壁产生吸附而使分离效率下降_】]。对此有对毛细 蛋白储备液 ：分别取适量的各种蛋 白样品，溶 管内表面进行修饰 及调整分离用缓冲体系2种 于水、定容，使成 lmg／mL，4oC保存，一般不超 解决方案。通过键合反应对毛细管内表面静态修饰 过3个工作 日。10mmolL／磷酸缓冲液(pl-t=2)。0．4％ 的方法，表面涂层稳定，但修饰过程繁琐，技术要 硼酸一0．3％硼酸钠缓冲液 (pH=9．0)。0．1％SDS一 求高。较为简便易行的方法是选择适当的酸碱缓冲 0．4％硼酸一0．3％硼酸钠缓冲液 (pH=9．0)。 体系，或添加表面活性剂、高分子材料、纳米材料 毛细管电泳测定条件 ：毛细管柱温 25℃ ；检 等形成动态涂层，改善蛋 白质与毛细管壁的吸附 测波长200nm；压力进样 (0．5psi)，进样 时 间 状况 j。特别是pH的调节，成本低、效果明显， 1Os；运行 电压 20kV ；柱清洗 ：每次进样前分别用 对大多数混合蛋 白样品都能达到有效分离。 水和缓冲液各冲洗 3min。每次分离后用0．1mol／L 寿崇琦等 报道用涂层方法分离溶菌酶等3 NaOH冲洗 3min。 种蛋 白的方法 ；张振中等 采用无胶筛分毛细管 2 结果与讨论 电泳分离牛血清 白蛋 白；项小兰等 也建立一种 采用微乳液毛细管电泳分离 一淀粉酶、牛血清白 2．1 分离条件选择的依据 蛋 白等几种蛋 白的方法。本文通过研究等电点在 蛋 白质为两性分子，多肽链上既有带正电的链 4～ 11范围内的仅一淀粉酶、溶菌酶、转铁蛋 白 段区域，也有带负电的区域 ；部分为憎水区域，部 和牛血清白蛋白在不同酸度下的电泳行为及分离状 分为亲水区域。对于某种蛋白质分子，不管其整体 况。建立一种简单、快速测定4种蛋白质的方法， 净电荷为正或负，都可能在毛细管内壁产生不同程 技术手段较简单，实际操作容易。 度的吸附，这与毛细管壁的解离状态有关。改变分 离用缓冲液的pH值，将改变毛细管内壁的解离状 1 实验部分