(六) 高通量表型分析 - 生命奥秘.PDF

无标记显微镜技术已存在多年，它依赖多个不同的光物理过程诱导生 物分子产生光信号。双光子荧光显微镜可以检测某些自体荧光物种。二次 谐波和三次谐波方法能够分辨纤维结构和脂质体。拉曼显微镜可以检测特 定类型的化学键，还能确定化学组成和脂质的丰度，但其背景强的缺点限 制了它的使用范围。 大约十年前，哈佛大学 （Harvard University ）Sunney Xie领导的小 组开发出了CA RS （相干反斯托克拉曼散射）显微镜，大大扩展了拉曼显 微镜的应用范围，但它在鉴定特定分子方面仍具有不足之处——相对较强 的与波长无关的非共振背景，这会导致测量的谱型与拉曼光谱有所区别， 因而限制了探测灵敏度。过去两年，Xie等人一直在改进CA RS方法。 2008年底，X ie等人报道了一种新的基于拉曼成像的方法—— 受激拉 曼散射 （SRS ）。这种方法克服了CA RS显微镜的某些缺点。SRS显微镜 让特定目标分子的鉴定更容易，且灵敏度非常高。一般来说，无标记方法 与荧光标记相比，分子特异性相对较差，这是主要缺陷之一。SRS就有望 缩小这个差距，它尤其适用于脂类这种很难进行荧光标记的小分子。2009 年，研究小组又开发出另一种基于受激发射的新型显微镜用于获取非荧光 图片说 明：由旧式技 术 —— 双 光 子 显 微 分子信号。 镜 、二次谐波和 三次 尽管目前还没有方法能完全取代荧光显微镜，或满足每个无标记成像 谐波显微镜技术所获 得的无标记成像。 实验的需求，但我们毕竟看到了无标记显微镜的转折点，对未来应该充满 信心。 原文检索：Daniel Evanko. (20 10) Label-free microscopy. Nature Methods 7(1): 36. 董云巧/编译 (六) 高通量表型分析 自动化评估模式生物表型方法的不断发展将会使探索生物学领域未开发之处女地成为可能。 如果你测出感兴趣的生物的全基因组序列，发展出研究基因组的新技术并构建出功能获得或 功能缺失的基因突变体文库，那么下一步该做什么呢？尤其是如果你倾向于进行全基因组层面的 研究，或进行经典突变和正向遗传性研究，你就需要一个更精确、更快速、更可靠的方法来鉴定 靶基因调节或敲除后表型的改变。 过去十多年，许多大规模研究工作都是通过复杂的手工操作完成的，这都归功于精巧的表型 检测实验设计和科学家的勤奋敬业。毫无疑问，自动或半自动化的表型研究方法的不断发展将使 以前不可能的任务成为可能。 事实上，一些研究人员正致力于将其它领域的相关技术引入模式生物表型研究。单单在 《自 Nature Methods ）杂志上就发表了数篇相关的新方法，这些方法使基于计算机进行表 然-方法》 （ 型判断成为现实，而这些细微的表型改变过去是无法被人眼发现的。 研究活体内细胞位置、细胞谱系、荧光报告基因表达等在光学显微镜下的变化也可以通过自 2525 生命奥秘 动化实现。如果没有自动化、没有大规模的数据处理，那么 这些研究是无法完成的。 当然这些方法投入使用后，相应的问题自然会浮出水 面，但随之也必然会被加以完善。只要还有人们感兴趣的表 型未被研究透彻，新方法就必然会不断涌现。 原文检索：Natalie de Souza. (20 10) High-throughput 图片说明：模式生物的高通量表型分 p