环境因素、CYP2E1基因多态性及p27Kip1蛋白表达与胃癌发生和发展关系的分析.pdfVIP

中文摘要 l?如÷ 《剪～ ／胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，虽然近年来在世界范围内胃 癌患病率呈持续下降趋势，但在我国其死亡率仍居首位。而且由 于受我国人均寿命的延长和人口老龄化的影响，目前胃癌患者的 绝对数量仍在增加，严重地威胁着人民的生命和健康。 众所周知，胃癌的发生与环境因子和遗传因素密切相关。在 环境因子中饮食因素尤为重要，尤其是N一亚硝基化合物，可在癌 症形成过程的不同阶段影响癌发生的危险性。在癌的遗传因素 中，癌的易感性问题是当前肿瘤研究的一个热点问题。由于细胞 酶，且又受乙醇和亚硝胺的强烈诱导，因而CYP2E1与亚硝胺类相 关癌症特别是胃癌的关系值得探讨。另外，在肿瘤的发生发展中， 癌基因的激活和抑癌基因的失活起着十分重要的作用。p27Kipl基 因是近年来发现的一个新的抑癌基因，其表达产物p27蛋白参与 调控细胞周期和细胞凋亡，为细胞周期负性调节因子，其表达下调 与肿瘤的进展和不良预后密切相关。IpL一 本研究把流行病学和分子生物学方法结合起来，从宏观和微 观来综合评价环境因子和遗传因素对胃癌的发生及生物学行为的 影响，分析可疑环境因素的作用及环境与基因的交互作用，为揭示 胃癌的病因及早期发现和预防提供依据。 ， ／材料与3-法 f 1．研究对象 病例选取2002年2月至2002年6月经中国医科大学附属第 ·1· 一医院肿瘤科确诊的原发性胃癌新病例48名(其中男性3l例、女 性17例，年龄范围：50—70岁)，对照为沈阳市第二、第八人民医 院普通外科同时期无消化道病史的非肿瘤患者48名(其中男性 28例、女性20例，年龄范围：55～72岁)。所有研究对象于入院次 日清晨抽取外周血5ml，枸橼酸钠抗凝，保存于一74℃的深冻冰箱 中，直至提取DNA。 2．流行病学调查 按事先设计的调查表，逐一对病例和对照进行调查，内容包 括：年龄、性别、民族等人口学指标及个人生活习惯、饮食情况、既 往患病情况和家族史等其它指标。 3．实验方法 (1)外周血DNA提取：采用水煮法。取抗凝血0．5rrd，按1：l 比例加入裂解液0．5ml，12000r／rain离心沉淀自细胞，其上清中含 有DNA，可用作PcR扩增的模板。用752分光光度计测DNA纯 度在1．2—2．0之间，含量100—600ng／止。4℃保存备用。 Rsa (2)CYP2E1I位点基因型检测：根据文献合成引物，采 用大连宝生物科技公司的合成引物。PCR反应总体积为50出，其 dNTP，0．5UTaq 中含模板2出，引物各2止，41．d DNA聚合酶(2斗1) Rsa 以及相应的缓冲液。取PCR产物15止，加入10UI(2出)和 2出缓冲液，并加双蒸水至201LLl，充分混匀后于37℃保温12小时。 2．2％琼脂糖凝胶(含0．5“g／ml溴化乙锭)电泳，自动凝胶电泳成 像分析仪上观察结果。纯合子野生型clcl可见360bp条带，纯合 带。 (3)胃癌组织p27K}p1蛋白表达的检测：采用免疫组织化学方 法(SABC法)。细胞浆、胞核出现棕色颗粒为阳性细胞，参照 Scott等方法，p27“一阳性细胞数I25％判定为阳性。 4．统计分析 ·2· 归分析。 结 果 以可能影响胃癌发生、发展的环境因素和遗传因素作为自变 量对是否患胃癌的应变量进行多因素非条件Logistic逐步回归分 析，结果显示：食盐、香肠和熟食的过多摄入以及具有肿瘤家族史 和c1等位基因作为胃癌的危险因素进入回归模型，而经常喝茶作 为保护性因子可能降低胃癌的发生危险。 CYP2E1基因Rsa