CRISPR-Cas9技术发展史25年的科学历程解析.PDFVIP

Chinese Journal of Nature Vol. 38 No. 4 HISTORY OF NATURAL SCIENCE doi:10.3969/j.issn.0253-9608.2016.04.008 - CRISPR Cas9技术发展史：25年的科学历程 郭晓强† 深圳市第二人民医院，广东深圳518035 摘要 CRISPR-Cas是一种重要的原核生物获得性免疫系统。CRISPR序列可转录并加工为非编码RNA——crRNA，而Cas利 用其DNA核酸外切酶完成RNA介导的靶DNA剪切，从而抵御噬菌体和质粒等DNA的入侵。在这一系统基础上改进并发明 目前生命科学领域广泛应用的CRISPR-Cas9基因编辑技术。通过对CRISPR序列发现、结构命名、功能预测、实验证实、机 制研究和系统改进等的描述，以期能对CRISPR-Cas9技术的诞生过程有一个全面的了解。 关键词 获得性免疫系统；原核生物；基因编辑；CRISPR-Cas9 19 5 3 年，DN A 双螺旋模型的提出确立了 基因组学，三位大师级科学家莱德伯格(Joshua DN A 在分子生物学乃至整个生命科学的 “中 Lederberg) 、科恩伯格(Arthur Kornberg)和桑格 心”地位。由于DNA 是遗传信息载体，因此对 (Frederick Sanger)为此做出了奠基性贡献。莱德伯 DNA进行精确操作(DNA编辑)进而调控生物学性 格奠定细菌遗传学基础，从而使简单的细菌成为 状的研究，其重要性不言而喻。三位在DNA编 分子生物学模式生物[1] ；科恩伯格则奠定细菌分 辑技术——基因敲除方面做出奠定性贡献的科学 子生物学酶学基础，开创酶学研究科学范式[2] ； 家分享了2007年诺贝尔生理学或医学奖。然而， 桑格则于1977年发明基因测序方法[3] ，从而使基 传统基因敲除技术尽管在阐明某些基因的功能方 因测序成为常规研究内容。CRISPR-Cas系统的发 面发挥了重要作用，但操作过程较为繁琐，周期 现则开始于细菌测序。 长，费时费力，亟需进一步完善。随后出现一系 1 9 8 7 年， 日本微生物学家石野 良纯 列DNA编辑技术，如ZFN(zinc finger nuclease)和 (Yoshizumi Ishino)在但中田(At su o N akata) 实 TALEN(transcription activator-like (TAL) effector 验室对大肠杆菌的碱性磷酸酶同工酶(alk alin e nuclease)等，尤其是20 12年出现的CRISPR-Cas9 phosphatase isozyme, iap)进行测序，为更好地理 技术更是以操作简便、快速、高效而迅速成为实 解基因表达调节的机制，在对编码区进行检测的 验室的必备技术之一，对推动生命科学的发展具 同时顺便对基因上游和下游序列完成了测序。在 有重要意义。此外，CRISPR-Cas9技术的发明也 iap 常规报道 基因编码序列的同时，他们意外地 是一个具有传奇色彩的历程。 发现终止密码子后的非编码区存在一些异常重复 序列[4] 。之所以异常源于两个原因：一方面原核 1 CRISPR序列的发现 生物如细菌的DNA利用率较高，因此它的重复 这项技术发明在一定程度上可追溯到2 0 序列较少(真核生物存在大量重复序列) ；另一方 世纪50年代开始的微生物遗传学、生物化学和 面传统的重复序列常为串联重复，而这次发现却 †通信作者，E-mail: xiaoqiangguo123@163.com 278