唾液淀粉酶最适PH的测定2013级11班.docxVIP

唾液淀粉酶最适PH的测定摘要： 本实验的目的是掌握测量 pH 对酶活力影响的基本原理和方法，掌握用碘-淀粉比色法的方法测定唾液淀粉酶的最适PH值。学会常用的缓冲溶液的配制方法。进一步熟悉分光光度计的使用。。影响酶反应活力的因素很多，影响胞外酶的因素主要包括 PH 值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子，以及酶浓度等因素。在温度、酶浓 度相同的条件下，酶的活力在最适 pH 处达到最大，远离则变小。在底物过量的 条件下，相同时间内，在温度、酶浓度相同的条件下，接近最适 pH 的反应体系 中消耗淀粉的量最大，剩余淀粉与过量碘液生成的颜色越浅，吸光度越小，利用 分光光度计测出各管的吸光度后， 取处于升高与降低趋势之间的较小吸光度范围 对应的 pH 值即为唾液淀粉酶的最适 pH。关键词：唾液淀粉酶、酶活性测定。前言：生物体内的酶是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质和核酸，前者是机体内催化各种代谢反应最重要的催化剂。酶分子中的许多极性基团。在不同的PH条件下解离状态不同，其所带电荷的种类和数量也各不相同，酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才最容易同底物结合或具有最大的催化活性。许多具有可解离基团的底物和辅酶的荷电状态也受PH改变的影响，从而影响酶对它们的亲和力。此外，PH还可以影响酶活性中心的空间构象，从而影响酶的活性。正文：实验原理：1.酶催化活性最高时反应体系的PH值称为酶的最适PH值。人体正常唾液PH值为6.6~7.1，吸光度值在6.0~8.0范围内随着PH的增大先减小后增大。2.在底物足量的条件下，相同时间内，在温度、酶浓度相同的条件下，接近最适PH的反应体系中消耗淀粉的量最大，剩余淀粉与碘液生成的颜色越浅，在660mm吸光度A越小，利用分光光度计测出各管的吸光度后，以PH为横坐标，吸光度值为纵坐标，曲线上最低点所对应的PH值即为唾液淀粉酶的最适PH值。实验材料： 移液枪，试管，吸量管（5ml，10ml），试管架，小烧杯，722型分光光度计，恒温箱，洗耳球 试剂：0.01mol/l碘液，0.2mol/l磷酸氢二钠，0.2mol/l磷酸二氢钠，淀粉溶液，唾液，蒸馏水实验步骤：缓冲溶液的配制，取七支试管进行编号1-7，按下表加入试剂 试管1234567PH6.26.46.66.87.07.27.40.2mol/l?Na2HPO4（ml）0.5 0.71.01.21.51.82.00.2mol/lNaH2PO4（ml）2.01.81.51.31.00.70.5蒸馏水（ml）2.52.52.52.52.52.52.5唾液的采集：先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉,口含蒸馏水，适宜时间后将蒸馏水连同唾液一同放置于小烧杯中，置于冰水中冷却。唾液稀释 取4支试管，进行编号1-6，按下表加入试剂 试管编号1234唾液（ml）1.00.50.40.25蒸馏水（ml）4.04.54.64.75稀释倍数5101520 取出另取4支试管进行编号1-4，各取上述稀释唾液1ml加入相应编号的试管，同时各加入1ml的0.02%的淀粉溶液，振荡混匀后放入37度恒温水浴5分钟后取出，滴加2-3滴碘液，混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数，再多配5ml该稀释倍数的稀释唾液。另取七支试管编号1-7.分别按下表加入试剂 试管编02%淀粉溶液（ml）1.01.01.01.01.01.01.02ml缓冲溶液PH6.26.46.66.87.07.27.4 混匀，37度恒温水浴五分钟稀释唾液（ml）1.01.01.01.01.01.01.0振荡混匀，37度恒温水浴3分钟取出，各加入2-3滴碘液，以蒸馏水作为对照，测吸光度值A6600.1630.0610.4081.3011.0221.8532.096在坐标纸上，以PH为横坐标，吸光度值为纵坐标，曲线上最低点所对应的PH即为唾液淀粉酶的最适PH。作出吸光度的变化曲线：因为唾液淀粉酶的活性是6.2到7.0，吸光度越低，则底物淀粉被分解的数量越多，酶活性越高，由上图数据可知，测得的唾液活性的最是pH是6.4。讨论：本实验中，当唾液淀粉酶的活性最大时，淀粉被分解得最多，剩余底物的量最少，A值最小，过酸或过碱均会抑制酶的活性，使之分解的底物减少，A值增大。由所作曲线可知唾液淀粉酶的最适pH值在6.4左右。在PH6.4时唾液淀粉酶的活性随PH的升高而增大，在PH=6.4达到最大值，在PH》6.4时唾液淀粉酶的活性随PH的升高而降低，因此唾液淀粉酶的最适pH值为6.4，如果过酸或过碱均会降低酶的催化活性。最适PH不是酶的特征性常数，它受底物浓度、缓冲液种类与浓度以及酶纯度等因素的影响。溶液PH高于或低于最适