胆固醇敏感器scap功能失调对thp-1源性巨噬 - 第三军医大学学报.pdf

　ｈｔｔｐ：／／ａａｍｍｔ．ｔｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　　 　　　　　　第三军医大学学报，２０１６，３８（５） ４４９ ＤＯＩ：１０．１６０１６／ｊ．１０００５４０４．２０１５０９０２９ 胆固醇敏感器ＳＣＡＰ功能失调对ＴＨＰ１源性巨噬细胞炎症因子表达的影响 １ １ １ ２ １ ２ 欧阳南 ，杜晓刚 ，陈利群 ，周　超 　　（４０００１６重庆，重庆医科大学附属第一医院：肾脏内科 ，心血管内科 ） 　　［摘要］　目的　观察胆固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白（ｓｔｅｒｏｌｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｌｅｍｅｎｔｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓｃｌｅａｖａｇｅａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＳＣＡＰ）功能失调对ＴＨＰ１源性巨噬细胞脂质代谢及ＩＬ１、ＭＣＰ１表 β 达的影响，探讨ＳＣＡＰ的促炎作用是否依赖于其介导的胆固醇稳态调节功能。方法　采用基因转染方 法在ＴＨＰ１源性巨噬细胞中过表达ＳＣＡＰ或沉默ＳＣＡＰ，结合使用炎症刺激剂ＬＰＳ（１ ｇ／ｍＬ）或ＳＣＡＰ μ 转位抑制剂Ｂｅｔｕｌｉｎ（３ ｍｏｌ／Ｌ）处理ＴＨＰ１源性巨噬细胞，将细胞分为对照组、过表达 ＳＣＡＰ组、沉默 μ ＳＣＡＰ组、ＬＰＳ组、沉默ＳＣＡＰ＋ＬＰＳ组、Ｂｅｔｕｌｉｎ组以及过表达ＳＣＡＰ＋Ｂｅｔｕｌｉｎ组，ＲＴＰＣＲ法检测过表达 ＳＣＡＰ或沉默ＳＣＡＰ对 ＨＭＧＣｏＡＲ、ｐｒｏＩＬ１、ＭＣＰ１基因表达水平的影响。油红Ｏ染色观察不同组别 β 细胞内中性脂质沉积的变化。酶法定量测定胞内胆固醇含量。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测ＳＣＡＰ、ｐｒｏＩＬ１ 以 β 及培养上清中ＩＬ１ 的蛋白水平。结果　 过表达ＳＣＡＰ组与对照组比较，其 ＨＭＧＣｏＡＲ、ＭＣＰ１、ｐｒｏ β ① ＩＬ１ 基因表达水平升高（Ｐ＜０．０１），细胞内ｐｒｏＩＬ１ 及细胞培养上清中ＩＬ１ 蛋白含量均上升（Ｐ＜ β β β ０．０５），且细胞内总胆固醇（ｔｏｔａｌｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，ＴＣ）及胆固醇酯（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｓｔｅｒ，ＣＥ）含量上升（Ｐ＜０．０１）。 沉默ＳＣＡＰ组与对照组比较，ＨＭＧＣｏＡＲ、ＭＣＰ１、ｐｒｏＩＬ１ 基因表达水平下降（Ｐ＜００５），细胞内ｐｒｏ ② β ＩＬ１ 及培养上清中成熟ＩＬ１ 蛋白含量均降低（Ｐ＜０．０５），且细胞内中性脂质蓄积减少，ＴＣ及 ＣＥ含 β β 量下降（Ｐ＜０．０５）；沉默ＳＣＡＰ＋ＬＰＳ组与ＬＰＳ组比较，ＭＣＰ１、ｐｒｏＩＬ１ 基因表达下调（Ｐ＜０．０５），成熟 β ＩＬ１ 蛋白水平下降（Ｐ＜０．０５）。过表达ＳＣＡＰ＋Ｂｅｔｕｌｉｎ组与过表达ＳＣＡＰ组比较，ＨＭＧＣｏＡＲ基因表达 β 水平下降（Ｐ＜０．０５），其细胞内，ＴＣ及ＣＥ含量亦下降（Ｐ＜０．０５），但ＭＣＰ１、ｐｒｏＩＬ１ 基因表达水平差 β 异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），培养上清中成熟ＩＬ１ 蛋白含量差异也无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论