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基于光谱法的酸性红92结合牛血清白蛋白的研究 - 西华师范大学学报
第37卷 第4期 西 华 师 范 大 学 学 报 (自然 科 学 版 ) 2016年 12月
Vol37 No4 JournalofChinaWestNormalUniversity(NaturalSciences) Dec.2016
文章编号:16735072(2016)04039607
基于光谱法的酸性红92结合牛血清白蛋白的研究
曹丽君,程正军,李 田,蒋晓慧
(西华师范大学 a.化学化工学院;b.四川省化学合成与污染控制重点实验室,四川 南充 637009)
摘 要:
通过荧光光谱、紫外可见光谱(UVvis)及傅里叶变换红外光谱法(FTIR)研究牛血清白蛋白(BSA)与酸
性红92(AR92)之间的相互作用。研究表明AR92对 BSA的荧光猝灭为静态猝灭。位点标记实验证明AR92结合
0 0 0
于 BSA上的位点 (子域 A)。热力学参数 G <0, H <0, S>0暗示 BSA与 AR92间结合是以静电力为主
Ⅰ Ⅱ △ △ △
要驱动力的自发放热过程。而且,还探讨不同盐浓度和乙醇对其结合作用的影响。此外,分析 AR92诱导 BSA的
构象变化。
关键词:
光谱法;牛血清白蛋白;酸性红92;荧光猝灭;构象变化
中图分类号:O65 文献标志码:A DOI:10.16246/j.issn.16735072.2016.04.007
[1] [2]
酸性红92(AR92,图1)是一种人造種吨着色剂,它已被用在食品、药物和化妆品等领域 。Qi等 研究
发现,过量的AR92会诱导细胞坏死和引发炎症反应。因此,研究 AR92与蛋白质的相互作用具有重要意义。
血清白蛋白(SA)是循环系统中的主要可溶性蛋白成分,作为转运蛋白来转运药物、脂肪酸和末端氨基树枝
[3]
状聚合物等多种物质 。由于牛血清白蛋白(BSA)易于纯化和成本低,并且它与人血清白蛋白(HSA)有
[4]
76%的相似性,因此,BSA已被广泛用作一个模型来评估蛋白质与有机小分子间的相互作用 。近年来,关
于有机小分子与蛋白质相互作用的研究已成为化学生物界研究热点之一。然而,AR92与 BSA结合特性尚
不明确。故本文运用多光谱法探讨 BSA和 AR92间相互作用,该研究可能为 AR92作为食品着色剂等方面
提供有用信息。
1 实验部分
1.1 材料
牛血清白蛋白(BSA,纯度 98%,Mr=68000)购自Ruibio公司,
使用时未纯化。BSA溶液用0.05M磷酸盐缓冲液(pH=7.4)配制。
AR92购自麦克林生物化学有限公司(中国,上海)。其它化学品均
为分析纯。所有溶液均在4℃下储存,整个实验使用的水均为二次
蒸馏水。
1.2 方法
所有荧光光谱均用配有恒温槽的CaryEclipse型荧光分光光度
计(美国,瓦里安)进行测定。BSA的浓度为2.0 M,AR92的浓度从0增加到 1.94 M。激发和发射狭缝宽
μ μ
均为5nm,激发波长280nm,波长范围300~500nm。所有荧光滴定实验均用50 L手动微量注射器完成。
μ
在存在和不存在盐(0.30、0.60、0.90M)或乙醇(5%和 10%,V/V)的磷酸盐缓冲液(0.05M,pH=74)
中进行盐和乙醇对 BSA与AR92相互作用影响的荧光滴定实验。
同步荧光光谱激发和发射波长的间隔 分别为 15nm和60nm,波长范围均为25
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