谷胱甘肽对vc一步发酵作用的研究.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１６，３６（８）：３８４５ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 谷胱甘肽对ＶＣ一步发酵作用的研究  翟兵兵　马　倩　丁明珠 　元英进 （天津大学化工学院系统生物工程教育部重点实验室　天津化学化工协同创新中心　天津　３０００７２） 摘要　谷胱甘肽（ＧＳＨ）能有效促进酮古龙酸杆菌的生长。就ＧＳＨ对氧化葡萄糖酸杆菌和酮古龙 酸杆菌一步混菌发酵的作用进行了探索，为进一步阐明维生素Ｃ一步发酵过程中氧化葡萄糖酸 杆菌和酮古龙酸杆菌的关系并提供发酵工艺优化的依据。研究发现，在５Ｌ的发酵罐中，外加 １ｍｇ／ｍｌ的ＧＳＨ对混菌的发酵有着显著的促进作用，２酮Ｌ古龙酸（２ＫＧＡ）产量提高了２２．８％。 通过１６ＳｒＤＮＡ荧光定量ＰＣＲ法测菌数，发现ＧＳＨ的添加使酮古龙酸杆菌的生长提高到１４８％， 但抑制氧化葡萄糖酸杆菌的生长，使其生物量下降到６１％。运用代谢组学方法分析发现，ＧＳＨ能 促进酮古龙酸杆菌的磷酸戊糖、三羧酸循环、硫酸盐等代谢，同时减缓氧化葡萄糖酸杆菌对Ｌ山 梨糖的消耗，以促进整个混菌体系的发酵效率。 关键词　谷胱甘肽　酮古龙酸杆菌　氧化葡萄糖酸杆菌　代谢组学 中图分类号　Ｑ９３９．９７ 　　ＧＳＨ是一种重要的抗氧化剂，可以防止细胞重要 将二步发酵工艺改进为一步发酵，可显著节约能耗，降 ［１２］ ［１４］ 成分的损坏 。它一旦被氧化，可以利用 ＮＡＤＰＨ为 低污染，显著提高经济效益。Ｓｕｇｉｓａｗａ等 从普通古 电子供体，在谷胱甘肽还原酶的作用下转变为还原型 龙酸菌ＤＳＭ４０２５发现了催化Ｌ山梨糖转化为ＫＧＡ的 谷胱甘肽，在细胞内的氧化型谷胱甘肽与还原型谷胱 醇醛脱氢酶，确认了山梨醇脱氢酶基因，将其导入 ［３］ ＤＳＭ４０２５，实现了从 Ｄ山梨醇一步发酵生成 ２ＫＧＡ。 甘肽的比例经常被用来作为衡量细胞毒性的依据 。 ［１５］ 这是细胞所产生的主要的内源性抗氧化剂，直接参与 Ｓｏｎｏｙａｍａ等 提出应用Ｇ．ｏｘｙｄａｎｓ实现山梨醇到古龙 ［１６］ 中和自由基和活性氧化合物的反应，以及以还原形式 酸的发酵。江南大学Ｇａｏ等 通过在 Ｇ．ｏｘｙｄａｎｓ内过 ［４５］ 表达山梨糖脱氢酶、山梨酮脱氢酶及辅酶ＰＱＱ，在该菌 维持外源抗氧化剂如维生素 Ｃ和Ｅ的还原状态 。 ＧＳＨ被用在如 ＤＮＡ的合成和维修，蛋白质的合成，前 中实现了由山梨糖到２ＫＧＡ的一步转化，发酵周期为 列腺素的合成，氨基酸转运，酶的活化等的代谢及生化 １６８ｈ。若去掉二步发酵中的伴生菌巨大芽孢杆菌，将 ［６７］ 两步发酵合成为一步发酵，混合培养 Ｇ．ｏｘｙｄａｎｓ与Ｋ． 相关的反应，因此，每个系统几乎都受到它的影响 。 　　二步发酵法是目前ＶＣ发酵的主要方法。目前，氧 ｖｕｌｇａｒｅ，可以显著降低能耗，缩短发酵周期，降低成本， ［８］ 减少污染，具有非常重要的研究价值。 化葡萄糖酸杆菌（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒｏｘｙｄａｎｓ）的改进 和酮