聚乙二醇化促胰岛素分泌肽类似物的修饰条件优化 - 重庆理工大学学报.pdf

第２８卷　第２期 重 庆 理 工 大 学 学报（自然科学） ２０１４年２月 Ｖｏｌ．２８　　Ｎｏ．２ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ｆｅｂ．２０１４  ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－８４２５（ｚ）．２０１４．０２．０１０ 聚乙二醇化促胰岛素分泌肽类似物的 修饰条件优化 １ １，２ １ １ ２ 贺晓强 ，范　开 ，蔡晓娜 ，刘立平 ，陈　清 （１．重庆理工大学 药学与生物工程学院，重庆　４０００５４； ２．重庆富进生物医药有限公司，重庆　４０００４１） 摘　　　要：用化学合成法获得 Ｃ末端氨基酸为半胱氨酸的Ｂｙｅｔｔａ类似物（ＢｙＣ３９），再采用分 子量为４０ｋＤａ的马来酰亚胺活化单甲氧基聚乙二醇（ｍＰＥＧｍａｌ４０ｋＤａ）对ＢｙＣ３９的半胱氨酸 巯基进行定点修饰，修饰产物通过阳离子交换层析和反向层析纯化获得。在已建立的定点修饰 反应和分离纯化工艺基础上，通过改变反应条件中修饰ｐＨ值、修饰缓冲体系，以及修饰保护剂 等因素来得到优化修饰条件：ｐＨ值为６．５的ＣＨＣＯＯＮａＣＨＣＯＯＨ缓冲液，保护剂为２．０ ３ ３ ｍｍｏｌ／ＬＬｙｓ和５．０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ，ｍＰＥＧｍａｌ４０ｋＤａ／ＢｙＣ３９摩尔比３∶１，２５℃反应４ｈ；经ＳＤＳ ＰＡＧＥ和ＲＰＨＰＬＣ检测，可知提高了修饰率以及增加了修饰产物的稳定性；最后加入ＴＦＡ终止 反应。 关　键　词：促胰岛素分泌肽；聚乙二醇；修饰条件 中图分类号：Ｑ７８　　　　文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４－８４２５（２０１４）０２－００４５－０４ ＭｏｄｉｆｉｅｄＣｏｎｄｉｔｉｏｎＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＰｅｇｙｌａｔｉｏｎ ｏｆＧｌｕｃａｇｏｎｌｉｋｅＰｅｐｔｉｄｅ１ １ １，２ １ １ ２ ＨＥＸｉａｏｑｉａｎｇ，ＦＡＮＫａｉ ，ＣＡＩＸｉａｏｎａ，ＬＩＵＬｉｐｉｎｇ，ＣＨＥＮＱｉｎｇ （１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００５４，Ｃｈｉｎａ； ２．ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＦａｇｅｎＢｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏ．Ｌｔｄ．，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００４１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｃｈｅｍｉｃａｌｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｔｈｅＣｔｅｒｍｉｎａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｉｓｃｙｓｔｅｉｎｅａｎａｌｏｇｕｅＢｙｅｔｔａ （ＢｙＣ３９）．Ａｎｄｔｈｅｎｕｓｉｎｇａｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｏｆ４０ｋＤａｍａｌｅｉｍｉｄｅａｃｔｉｖａｔｅｄｍｏｎｏｍｅｔｈｏｘｙｐｏｌｙｅｔｈｙ ｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ（ｍＰＥＧｍａｌ４０ｋＤａ）ｏｎＢｙＣ３９ｓｅｎｔｉｎｅｌｃｙｓｔｅｉｎｅ？？ｔｈｉｏｌｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｄ ｕｃｔｉｓｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｃａｔｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄｒｅｖｅｒｓｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｔｏｏｂｔａｉｎ．Ｉｎｔｈｅｅｓｔａｂ ｌｉｓｈｅｄｐｏｉｎｔｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅａｃｔｉｏｎａｎｄｓｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉ