微生物与发酵工艺实训 - 生物在线.docVIP

微生物与发酵工艺实训 ? 实训一 显微镜的使用和微生物测微技术 ? 实训二 细菌形态的观察 ? 实训三 细菌的简单染色和革兰氏染色 ? 实训四 微生物细胞数的计数 ? 实训五 培养基的制备与灭菌 ? 实训六 微生物的纯种分离培养 ? 实训七 紫外线诱变选育α-淀粉酶高产菌株 ? 实训八 固定化技术 ? 实训九 酒精发酵 ? 实训十 亚硫酸盐氧化法测定KLɑ ? 实训十一 谷氨酸发酵的代谢曲线测定 实验1 显微镜的使用和微生物测微技术 一、实验目的 1. 练习和掌握显微镜的使用方法（低倍镜、高倍镜、油镜）。2. 掌握使用测微尺测定微生物大小的方法，熟悉微生物大小的一般概念。二、显微镜的构造 ? 　　　图1-1 单目光学显微镜　　　　　　　　　　图1-2 双目光学显微镜 人的眼睛只能识别大小为0.1 mm的物体。显微镜是精密的放大仪器，是生物学研究不可缺少的工具。我们用它可以观察肉眼看不见的微小生物的结构。最常用的是光学显微镜，为了正确操作、妥善保管和维护显微镜，延长使用年限，我们必须首先了解显微镜的结构和功能。一台显微镜包括机械系统和光学系统两大部分。现在一般实验室里常用的，是以图1-2为代表的双筒光学显微镜。现以它为例详述显微镜结构和功能如下。（一）机械部分1．镜筒? 显微镜上部圆形中空的长筒，筒口上端安装两个相同放大倍数的目镜，下端与物镜转换器相连，作用是保护成像的光路与亮度。由于观察者的瞳距有所不同，双筒显微镜多配有瞳距调整装置。2．转换器?固定在镜筒下端，分两层，上层固定不动，下层可自由转动。转换器上有2～4个圆孔，用来安装不同放大倍数的物镜。3.　物镜?安装在转换器下半部分的透镜，多为放大倍数不同的四个。可通过旋转转换器改变观察用物镜。4．粗准焦螺旋　在镜臂的下部，直径较大。通过转动粗准焦螺旋，使载物台上下移动，从而粗略的调节像距。5．细准焦螺旋　在镜臂的下部，一般与粗准焦螺旋同心安装，直径较小。它调整像距的范围较粗准焦螺旋小，可以精细调整像距。6．镜座　显微镜的底部、镜臂下方呈马蹄形的金属座，用以稳固和支持镜身。7．镜柱　从镜座向上直立的短柱。上连镜臂，下连镜座，可以支持镜臂和载物台。8．载物台　从镜臂向前方伸出的金属平台。呈方形或圆形，是放置载玻片或标本的地方。中央有通光孔，通光孔左右各有一个弹性的金属压片夹，用来固定载玻片。9. 推进器?较高级的显微镜，在载物台上常具有推进器，它包括夹片夹和推进螺旋，除夹住切片外，还可使切片在载物台上左右方向和上下方向移动。（二）光学系统1．目镜 ?又叫接目镜。它是安装在镜筒上端的凸透镜镜头。每台显微镜的目镜都配有一套，一般包括例如 5×、10×、15×、20×。镜筒上只能安装一个目镜，通常选择10×。2．物镜　是决定显微镜质量的关键部件。安装在转换器的孔上，也是由一组透镜组成的，能够把物体清晰地放大。一般转换器上同时安装三个或4个放大倍数不同的物镜，即：低倍物镜（4×、8×或10×）、高倍物镜（40×或45×）和油浸物镜（90×或100×），根据需要选择使用。3．光源??双目显微镜采用电灯作为光源，并可调整光源亮度。在不使用显微镜作观察时，应尽量关闭光源，以延长灯泡使用寿命。对于单目显微镜，光源由反光镜承担，它是安装在聚光器下面的一个可作各种方向的翻转的一面平、另一面凹的双面圆镜，反射光线以供观察。光线较强时使用平面镜，反之使用凹面镜。4．聚光器　聚光器是安装在载物台下面的一个凸透镜，可集中光源投射来的光线。在载物台下方有一个聚光器调节螺旋，它可以使聚光器升降，用以调节光线的强弱，下降时亮度降低，上升时亮度加强。5．虹彩光圈　又称可变光阑，由多数金属片组成。使用时移动其把柄，可控制聚光器透镜的通光范围，用以调节光的强度。虹彩光圈下常附有金属圈，其上装有滤光片，可调节光源的色调。6．遮光器　有些简单的显微镜无聚光器和虹彩光圈，而是装有遮光器。遮光器呈圆盘状，上面有大小不等的圆孔（光圈）。光圈对准通光孔，可以调节光线的强弱。7.在转换器上方、与镜筒相接的部位，其内部有光亮度很高的平面镜，将从物镜透射进来的光线反射进目镜中。三、实验原理 （一） 显微镜的工作原理1.显微镜的成像原理 显微镜的放大作用是由物镜和目镜共同完成的。标本经物镜放大后，在目镜的焦平面上形成一个倒立的实像，再经目镜的进一步放大形成一个虚像，被人的眼睛所观察到。图1-3 显微镜成像原理2.影响显微镜放大效果的因素 数值孔径（numerical aperture，N.A.）：N.A.=n﹒sinα/2,其意义为物镜与标本间介质折射率n和光的最大入射角α半数正弦的乘积。n是影响数值孔径的因素，空气的折射率n=1.0，水