乙肝表面抗原在微球表面的吸附行为、活性和结构变化 - 马光辉组.pdfVIP

第 10卷第3 期 过 程 工 程 学 报 Vol.10 No.3 2010 年 6 月 The Chinese Journal of Process Engineering June 2010 乙肝表面抗原在微球表面的吸附行为、活性和结构变化 1,2 1 1,2 1,3 1 1 李 娜 ，王连艳 ，吴有斌 ，曾烨婧 ，马光辉 ，苏志国 (1. 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京 100190；2. 中国科学院研究生院，北京 100049； 3. 北京化工大学生命科学与技术学院，北京 100029) 摘 要：采用快速膜乳化技术结合溶剂挥发法制备了尺寸均一的聚乳酸(PLA)微球，平均粒径为 800 nm 左右，并采用 PLA 微球对乙肝表面抗原(HBsAg)进行了吸附研究，考察了 pH 值、盐浓度、微球用量、HBsAg 浓度及吸附温度对 HBsAg 吸附率、活性和结构的影响. 结果表明，在 pH 6.0 的磷酸缓冲溶液中，NaCl 浓度为 20 g/L 、微球用量为 20 mg/mL 、HBsAg 浓度为 10 µg/mL 、吸附温度为 37 ℃的条件下，HBsAg 吸附率可达 60%左右. 4 ℃下，pH 值为 8.0 及 NaCl 浓度为 1 g/L、微球用量为2 mg/mL 及 HBsAg 浓度为 300 µg/mL 时，HBsAg 活性保留可达 98% 以上. 关键词：聚乳酸微球；乙肝表面抗原；吸附；生物活性；结构 中图分类号：R944.5 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2010)03−0559−09 因吸附会发生一系列相互作用及变化，是否会导致蛋白 1 前 言 质结构和活性变化，目前国内外还没有系统研究，难以 随着基因工程技术的发展，很多蛋白质药物通过基 获得高效的蛋白质药物制剂. 主要原因之一可能是包埋 因重组技术得到有效开发. 由于蛋白质药物在体内易被 后蛋白质活性及结构变化的检测较困难. 包埋后蛋白质 酶降解[1−3] ，目前绝大多数都采用注射给药，但存在半 与固体球内表面相互作用和其与空白微球外表面的作 衰期短、药代动力学性质差、需频繁注射给药等缺点， 用规律相似，因此，本研究采用空白微球吸附蛋白质的 不仅给患者带来痛苦和不便，且体内血药浓度易产生明 作用方式，以可生物降解聚乳酸[Poly(lactic acid), PLA] 显的峰谷现象导致药效降低或毒副作用. 用生物可降解 微球为模型微球，以乙肝表面抗原(Hepatitis B Surface 高分子微球包埋蛋白质药物制备成缓释制剂，不仅可通 Antigen, HBsAg)为模型蛋白质，系统研究 HBsAg 在微 过缓、控释作用实现长效皮下注射给药，且可通过微球 球表面的吸附行为、活性和结构变化规律，期望从根本 表面和粒径的设计，实现口服、粘膜、吸入等新的给药 上探索蛋白质微包埋过程中的抗失活策略. [4−7] [8] 途径，是国内外研究的热点 . Miyata 等 制备的口服 本研究选择的 HBsAg 是由 100 多个亚基靠非共价 壳聚糖载胰岛素毫微球具有缓释作用，有效防止了药物 键作用形成的大分子蛋白质，分子量超过 2000 kDa ，密 在胃肠道降解，使降糖效果长达 10 h 以上；Vila 等[9]