cd133＋结肠癌始动细胞分离鉴定及耐药相关 - 第三军医大学学报.docVIP

人HCT116结肠癌细胞系中CD133＋结肠癌干细胞分离及鉴定 陈克力，梁后杰，江恒，陈建芳，裴莉，郑晨宏(第三军医大学西南医院肿瘤科,重庆400038) 摘要：目的：从人结肠癌细胞系（HCT116）中分离鉴定结肠癌干细胞，并观察其体外生物学特性。方法：利用RT-PCR、免疫荧光、流式细胞等技术检测HCT116细胞中CD133的表达情况，利用免疫磁珠分选技术分选CD133＋细胞，无血清培养分选后的CD133＋细胞观察其生物学特性。结果：HCT116细胞系中存在CD133＋细胞，免疫磁珠能有效的分选CD133＋细胞，分选后的阳性含量为91.92%。结论：体外培养的CD133＋结肠癌干细胞具有和普通干细胞类似的无限增殖、自我更新和分化能力，同时它们也表达ABCG2等耐药相关蛋白。 关键词:　HCT116；结肠癌干细胞；CD133；分离及鉴定； Isolation and identification of CD133＋ colon cancer stem cells in HCT116 colon cancer cell lineSouthwest Hospital , Third Military Medical University , Chongqing 400038 , China) ABSTRACT: Objective To isolate colon cancer stem cells from human colon cancer cell line HCT116 and observe their biological characteristics in vitro. Methods The expression of CD133 in HCT116 cell line was investigated by Immunofluorescence and FlowCytometry. CD133+ cells were isolated with Magnetic beads. And then the CD133+ cells were cultured in serum-free medium for further study. Results There were a few CD133+ cells inHCT116 cell line. CD133+ cells could be enriched by magnetic islation. The percentage of CD133+ cells wasapproximate to 91.92％ after isolation. Conclusion CD133+ cells that cultured in vitro ha the capabilities for generation, self-renewing and differentiation as wellas normal stem cells. They also express drug resistance associated-proteins such as ABCG2. Key Words：; colon cancer stem cells; CD133; Isolation and identification; 结肠癌是临床最常见的恶性肿瘤和致死因素之一，化疗是治疗晚期和转移性结肠癌的主要治疗手段，虽然近年来新的化疗药物不断涌现，化疗方案不断更新，但是其完全缓解率和长期生存率仍然低下，目前认为这种情况的出现可能和肿瘤内存在少量肿瘤干细胞有关，这种细胞在肿瘤组织充当干细胞的角色，，ucia[2]等学者研究发现：同许多实体瘤一样，在结肠癌中同样存在着少量的CD133＋细胞，这些细胞能始动和维持结肠癌，和结肠癌耐药和治疗失败密切相关，找到这种干细胞，并对其生物学特性进行研究对结肠癌的诊断、治疗具有十分重要的意义,为此，本文尝试从结肠癌细胞系（HCT116）中分离CD133＋细胞,并对其进行生物学鉴定，以期为结肠癌干细胞的功能研究奠定基础。 1 材料与方法 1.1实验材料 HCT116细胞系由西南医院肿瘤科提供，培养液为含10%胎牛血清的DMEM完全培养基（GIBCO，美国）。细胞在5％CO2，37℃饱和温度培养箱中培养。 1.2实验方法 1.2.1 免疫荧光及免疫组化检测：HCT116细胞用0．25％ 的胰酶消化，接种在24孔培养板孔中的10mm盖玻片上，加少许培养液，待细胞贴壁后，加1ml培养液，培养72 h后弃去培养基，0．01％PBS洗涤3次，然后用4％ 多聚甲醛在室温下固定20 min，0．01％PBS洗涤3次，1％ 正常山羊血清(中杉金桥，中国)