产品组分及规格： ripa（免疫沉淀） 储存条件： ripa 操作方法：.pdfVIP

产品简介： RIPA （免疫沉淀）蛋白抽提试剂盒应用于哺乳动物细胞及组织样品蛋白的提取。 所提取的总蛋白，可进行 IP、Co-IP、SDS、Western Blot、蛋白纯化等， 可用 BCA 法进行蛋白定量。 产品组分及规格： RIPA （免疫沉淀） 50ml 0.1M PMSF 1.0ml 储存条件： RIPA 2-8℃ 稳定保存一年 0.1M PMSF -20℃ 稳定保存一年 操作方法： 一、贴壁细胞蛋白提取 1. 使用前请将 RIPA 预冷，并放置在冰上； 2. 小心倾去贴壁细胞的培养液，轻缓的加入预冷 PBS 漂洗细胞 3 次； 3. 在进行蛋白抽提前将 PMSF 加入 RIPA 中，终浓度为 1mM （取0.1M PMSF 1ul 加入到 99ul 蛋白抽提试剂中）； 4. 根据细胞生长的密度及细胞计数结果加入适量的已经加有蛋白酶抑制剂的 RIPA，（在 冰上用枪头吹打贴壁细胞，将裂解下来细胞的混合液转移至 EP 管中或者用胰酶消化细 胞，转移至 EP 管中 1,500×rpm，离心 3min，齐去 PBS，重复用 PBS 洗细胞 3 次，最后 一遍弃去 PBS 后加入抽提试剂），冰上孵育 20 分钟，让细胞充分裂解（试剂使用量请 参考附表 1）； 5. 4 度，12,000rpm 离心 20min； 6. 转移上清液至新管中，用于进一步分析。 二、悬浮细胞蛋白提取 1. 使用前请将 RIPA 预冷，并放置在冰上； 2. 将悬浮细胞进行计数并用 1,500×rpm，离心 3min，弃去上清；用预冷 PBS 重新漩起细 Bioeasy （beijng）Technology Co. Ltd manufactures and sells high quality antibody products for research use only Applications: WB-Western blot IHC-Immunochemistry IF-Immunofluorescence IP-Immunoprecipitation ChIP-Chormatin Immunoprecipitation Reactivity: H-Human R-Rat M-Mouse Mk-Monkey Dg-Dog Ch-Chicken Hm-Hamster Rb-Rabbit Sh-Sheep Pg-Pig 胞移至 EP 管中，1,500×rpm，离心 3min，齐去 PBS，重复用 PBS 洗细胞 3 次，最后一 遍弃去 PBS 待用； 3. 在进行蛋白抽提前将 PMSF 加入 RIPA 中，终浓度为 1mM （取0.1M PMSF 1ul 加入到 99ul 蛋白抽提试剂中）； 4. 根据细胞计数结果加入适量已经加有蛋白酶抑制剂的 RIPA，吹打均匀，冰上孵育 20 分 钟，让细胞充分裂解（试剂使用量请参考附表 2）； 5. 4 度，12,000rpm 离心 20min； 6. 转移上清至新管中，进行下一步分析。 三、组织蛋白提取 1. 使用前请将 RIPA 预冷，并放置在冰上； 2. 在进行蛋白抽提前将 PMSF 加入 RIPA 中，终浓度为 1mM （取0.1M PMSF 1ul 加入到 99ul 蛋白抽提试剂中）； 3. 称量组织样品的重量，按照组织重量：蛋白抽提试剂体积=1：10 （1g 组织 10ml 蛋白抽 提试剂）的比例加入 RIPA 并匀浆处理。操作细节：先在冰块上用眼科剪把组织块剪碎， 加入蛋白抽提试剂后移至玻璃匀浆器在冰