涉及生物类的专利申请.docVIP

权 利 要 求 书 1、一种快速定量检测猪瘟病毒和猪瘟弱毒疫苗的荧光定量PCR试剂盒，该试剂盒包括 a) RNA裂解液，b) 逆转录酶，c) RNA酶抑制剂d) Taq DNA 聚合酶，e) 标准阳性模板，f) 逆转录反应液和 g)荧光定量反应液，其特征是：逆转录反应液含有反向引物，其序列为5(-ATCAGGTCGTACTCCCATCAC-3(，荧光定量反应液含有引物和荧光探针5(-TAGCCATGCCCATAGTAGG-3(和5(-ATCAGGTCGTACTCCCATCAC-3(，荧光探针5(-TACAGGACAGTCGTCAGTAGTTCGACGTGA-3(，荧光探针5(端标记的荧光基团是FAM，3(端标记ROX，标准阳性模板pGS是含有猪瘟兔化弱毒株5(端pGEM-T载体构成的，且该载体可在大肠杆菌DH5(中增殖。 2、根据权利要求1所述的一种快速定量检测猪瘟病毒和猪瘟弱毒疫苗荧光定量PCR试剂盒，其特征是：逆转录反应液是由10(mol/L向引物，RT5(buffer,10mmol/L dNTPs和无菌双蒸水组成荧光定量反应液是由PCR10(buffer,10(mol/L的正向引物和反向引物，1(mol/L荧光探针，25mmol/L MgCl2 ,10mmol/L dNTPs和无菌双蒸水组成。pGS的核苷酸插入序列为： gtatacgagg ttagttcatt ctcgtataca cgattggaca aatcaaaatt ataatttggt 60 tcagggcctc cctccagcga cggccgaact gggctagcca tgcccatagt aggactagca 120 aaacggaggg actagccata gtggcgagct ccctgggtgg tctaagtcct gagtacagga 180 cagtcgtcag tagttcgacg tgagcagaag cccacctcga gatgctacgt ggacgagggc 240 atgcccaaga cacaccttaa ccctagcggg ggtcgctagg gtgaaatcac gccacgtgat 300 gggagtacga cctgataggg cgccgcagag gcccactatt aggctagtat aaaaatctct 360 gctgtacatg gcacatggag ttgaatcgct ttgaactttt 400 5、权利要求１所述的荧光定量PCR试剂盒在快速定量检测猪瘟病毒和猪瘟兔化弱毒疫苗中的应用。 　 说 明 书 摘 要 本发明公开了一种快速定量检测猪瘟病毒和猪瘟兔化弱毒疫苗的荧光定量PCR试剂盒，利用该试剂盒快速定量检测猪瘟病毒和猪瘟兔化弱毒疫苗的方法以及该试剂盒在快速定量检测猪瘟病毒和猪瘟兔化弱毒疫苗中的应用。该试剂盒及方法克服了传统和现代方法中存在的不足，可有效方便地对猪瘟病毒和猪瘟兔化弱毒疫苗进行定量检测以及对猪瘟兔化弱毒疫苗生产进行质量监控。 说 明 书 一种快速定量检测猪瘟病毒和猪瘟兔化弱毒疫苗的荧光定量PCR试剂盒及应用 技术领域 本发明涉及一种快速定量检测猪瘟病毒和猪瘟兔化弱毒苗的荧光定量PCR试剂盒，适用于猪瘟病毒和猪瘟兔化弱毒苗的定量检测以及疫苗质量时实监控，还涉及在检测猪瘟病毒和猪瘟兔化弱毒苗中的用途。 背景技术 猪瘟是猪的一种高度接触性传染病疫苗接种是控制猪瘟的重要手段。中国猪瘟兔化弱毒（Hog Cholera Lapinized irus，HCLV）免疫快对种猪、乳猪无残余毒力免疫猪可抵抗猪瘟强毒株的攻击国际上公认的安全有效的弱毒疫苗在国内外被广泛应用，对猪瘟的控制起到了重要作用王家富, 张楚瑜, 傅烈振,中国猪瘟兔化弱毒 NS2－3基因的序列分析[J]病毒学报2000, 16: 150-154.）。 疫苗效价的高低是疫苗合格与否的关键指标。HCLV在细胞中的增殖力弱，不产生致细胞病变，兔体定型热反应法（, 中华人民共和国兽用生物制品规程[S]. 2000年版.）但周期长报道用微