青虾Ran 基因的克隆、表达及其在卵巢发育中的功能 - 中国水产科学.PDF

中国水产科学 2017 年5 月, 24(3): 459469 Journal of Fishery Sciences of China 研究论文 DOI: 10.3724/SP.J.1118.2017.16365 青虾Ran 基因的克隆、表达及其在卵巢发育中的功能 1 1, 2 2 2 2 2 2 2 卜宗元, 傅洪拓 , 孙盛明, 乔慧 , 金舒博 , 张文宜, 龚永生, 蒋速飞 , 2 2 熊贻伟, 吴滟 1. 南京农业大学 无锡渔业学院, 江苏 无锡 214081; 2. 中国水产科学研究院 淡水渔业研究中心, 农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室, 江苏 无锡 214081 摘要: 本研究应用RACE 技术克隆了青虾(Macrobrachium nipponensis) Ran (Ras related nuclear protein, Ras 相关核 蛋白)基因全长cDNA 序列, 该基因cDNA 全长 1191 bp, 包括218 bp 的5ʹUTR, 648 bp 的开放阅读框(ORF), 405 bp 的3ʹUTR, 编码215 个氨基酸。青虾Ran 基因属于 P-loop-NTPase 超级家族, 拥有 PTZ00132 跨结构域, 多肽分子 量约为24.57 kDa, 理论等电点7.13 。系统进化树分析表明, 在动物界进化中非常保守的青虾Ran 多肽与罗氏沼虾 (Macrobrachium rosenbergii)聚为一支, 具有最近的亲缘关系。使用荧光定量PCR 技术检测Ran 基因在成体青虾不 同组织和卵巢不同发育期的表达差异, 结果显示, Ran 基因在青虾不同组织中均有表达, 其表达量在卵巢中最高, 是精巢表达量的7~8 倍; 随着卵巢的发育, Ran 基因的表达水平呈现上升趋势, 在卵巢消退期又恢复到较低水平。 RNA 干扰后, 实验组Ran 基因表达量显著低于对照组(P0.05), 同时卵巢发育关键基因Vg(vitellogenin)在卵巢中的 表达量也显著低于对照组(P0.05), 推测Ran 基因参与雌性卵巢发育过程并对 Vg 基因的表达起到调控作用。 关键词: 青虾; Ran 基因; 克隆; 卵巢发育; RNA 干扰 中图分类号: S917 文献标志码: A 文章编号: 10058737(2017)03045911 Ran(Ras related nuclear protein, Ras 相关核 母细胞的细胞发育周期有着重要影响[7−8] 。李常健 蛋白)是小G 蛋白家族的一员[1], 真核生物的小G 等[9−10]发现 Ran 在异育银鲫(Carassius auratus 蛋白可以分为 5 个家族: Ras, Rab, Rho, Arf 和 gibelio)生殖细胞的发生和发育、精核解凝中发挥 [2] [3] [11] Ran 。Drivas 等 首次在人畸胎瘤细胞cDNA 中 作用。Zhou 等 发现Ran 基因可能影响斑节对虾 发现了Ran 基因的开放阅读框, 随后Bischoff 等[4] 的卵巢发育, 然而 Ran 基因在青虾的克隆与表达 从 HeLa 细胞中分离纯化到 Ran 多肽分子。 研究未有报道。 Koizumi 等[5]发现 Ran 具有 GTP 酶活性, 能连接 青虾(Macrobrachium nipponense)又名日本沼虾, 并水解 GTP, 参与真核细胞 DNA 复制、RNA 的 隶属于十足目(Decapoda), 长臂虾科(Palaemonidae)