8-2014-工作手册-第四章-第八节-非法添加物..docxVIP

第八节非法添加物1 食品中苏丹红染料测定的标准操作程序食品中苏丹红染料测定的高效液相色谱法标准操作程序如下：1 适用范围本程序规定了高效液相色谱法测定红辣椒粉等粉状样品、红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品、辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品、香肠等肉制品中苏丹红染料的条件和详细分析步骤。本程序适用于红辣椒粉等粉状样品、红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品、辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品、香肠等肉制品中苏丹红染料的测定。本程序的检测限为10μg/kg，定量限为30μg/kg。2 原理苏丹红染料一般不溶于水易溶于有机溶剂，待测样品经有机溶剂提取，经浓缩及氧化铝柱层析萃取净化，用反相高效液相色谱—紫外可见光检测器进行色谱分析，采用外标法定量。3 试剂3.1 乙腈 色谱纯3.2 丙酮 色谱纯、分析纯3.3 甲酸 分析纯3.4 乙醚 分析纯3.5 正己烷 分析纯3.6 无水硫酸钠 分析纯3.7 层析柱管：1cm (内径)×5cm (高)的注射器管。3.8 层析用氧化铝（中性 100目～200目）：105℃干燥2h，于干燥器中冷至室温，每100g中加入2mL 水降活，均匀后密封，放置12h 后使用。3.9 氧化铝层析柱：在层析柱管底部塞入一薄层脱脂棉，干法装入处理过的氧化铝至3cm高，经敲实后加一薄层脱脂棉，用10mL 正己烷预淋洗，洗净柱杂质后，备用。3.10 5%丙酮的正己烷溶液：吸取50mL 丙酮用正己烷定容至1L。3.11 标准物质：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ；纯度≥95%。3.12 标准贮备液：分别称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ及苏丹红Ⅳ各10.0mg（按实际含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至250mL。4 仪器与耗材4.1 高效液相色谱仪（配有紫外可见光检测器）4.2 分析天平：感量 0.1mg4.3 旋转蒸发仪4.4 均质机或匀浆机4.5 粉碎机4.6 离心机4.7 0.45μm有机滤膜5 操作步骤5.1 样品制备：将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需粉碎磨细。5.2 样品处理：5.2.1 红辣椒粉等粉状样品 称取1g ～ 2 g（准确至0.001 g）样品于三角瓶中，加入正己烷10mL ～20mL，超声处理5min，过滤，用正己烷10 mL洗涤残渣数次，至洗出液无色，合并正己烷液，用旋转蒸发仪浓缩至5 mL 以下，慢慢加入氧化铝层析柱中，为保证层析效果，在柱中保持正己烷液面为2mm左右时上样，在全程的层析过程中不应使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗浓缩瓶，一并注入层析柱。控制氧化铝表面吸附的色素带宽宜小于0.5cm，待样液完全流出后，视样品中含油类杂质的多少用正己烷10mL ～30mL洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL 洗脱，收集、浓缩后，用丙酮转移并定容至5mL，经0.45μm有机滤膜过滤后待测。5.2.2 红辣椒油、火锅料、奶油等油状样品称取0.5g～2g（准确至0.001 g）样品于小烧杯中，加入约1mL ～ 10mL 正己烷溶解,难溶解的样品可于正己烷中加温溶解。然后按1中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm有机滤膜过滤后待测”操作。5.2.3 辣椒酱、番茄沙司等含水量较大的样品 称取10g ～ 20g (准确至0.01g)样品于离心管中，加10mL ～20mL水将其分散成糊状，含增稠剂的样品多加水，加入30mL 正己烷 ：丙酮 =3 ：1，匀浆5min ，3000 rpm离心10min，吸出正己烷层，于下层再加入20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次正己烷，加入无水硫酸钠5g脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸干并保持5分钟，用5mL 正己烷溶解残渣后，按1中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm有机滤膜过滤后待测”操作。5.2.4 香肠等肉制品 称取粉碎样品10g ～ 20g (准确至0.01g)于三角瓶中，加入60mL 正己烷充分匀浆5min，滤出清夜，再以20mL2次正己烷匀浆，过滤。合并3次滤液，，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸至5mL以下，按1中“慢慢加入氧化铝层析柱……经0.45μm有机滤膜过滤后待测”操作。5.3 测定5.3.1 色谱检测条件5.3.1.1 色谱柱：Zorbax SB-C18 3.5μm 4.6mm150mm（或相当型号色谱柱）5.3.1.2 流动相： 溶剂A （85+15）0.1%甲酸的水溶液－乙腈 溶剂B （80+20）0.1%甲酸的乙腈溶液－丙酮5.3.1.3 梯度洗脱条件：见表1。表1梯度洗脱条件流速（mL/min）时间（min）流动相曲线A%B%1.002575线性1.010.02