MAPK和PKC在大鼠动脉球囊损伤术后表达及通心络干预治疗影响.pdfVIP

中文摘要 前 言 经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)是心血管病治疗学上的一项重大突 破，但再狭窄(as)的高发生率严重影响了FrCA的远期疗效。目前认为， RS主要机理为扩张动脉段的弹性回缩、血管平滑肌细胞(VSMC)迁移与增 殖、细胞外基质合成、管壁重塑以及血栓的参人与机化。在再狭窄形成过程 中发挥作用的各种活性物质和生长因子均通过特异受体，经过细胞内信号 传递产生转录因子，启动特定核内基因的表达而产生生物学效应。丝裂素 活化蛋白激酶(MAPK)是细胞内多种促细胞增殖信息传递的共同通路或称 会聚点，是细胞表型变化和增殖的关键酶。蛋白激酶C(PKC)不仅是细胞 外信号引起细胞浆内短期生物效应的重要通路，而且在核反应中亦具有重 生长因子(VEGF)是一种特异的内皮细胞促分裂剂，对血管平滑肌细胞、成 纤维细胞无促分裂作用。VEGF在再狭窄的防治中可能起重要作用。通心 络由河北以岭药业集团研制，已广泛应用于冠心病治疗。本实验通过制作 大鼠动脉球囊损伤模型，使用通心络进行干预治疗，旨在从分子生物学水平 证实通心络可以从多环节抑制内膜增生及再狭窄机制的研究。 实验材料与方法 16周。中国医科大学实验动物部提供。 按照Deman等方法改良制备大鼠主动脉球囊成形术模型。经股动脉插入 自制2F Fogarty球囊导管至胸主动脉，损伤扩张腹主动脉。 后给药组45只，术后3d、7d和14d各15只。正常对照组15只。 4-动物处死及取材：动物称重，戊巴比妥钠腹腔麻醉。肝素生理盐水灌 流。分别取腹主动脉3．0em，截成3段。分别置于10％甲醛液、2．5％戊二 醛固定、液氮罐中冷冻，后置于～70t2深冻冰箱保存。 5．病理标本制作 (1)光镜标本：10％甲醛固定，石蜡包埋，连续冰冻切片，行HE染色。 (2)电镜标本：2．5％戊二醛固定，1％锇酸后固定，Epon812浸透包埋， 超薄切片分铀·铝染色。 [r一”P]ATP体外标记磷酸化方法进行MAPK活性测定。 记磷酸化方法进行PKC活性测定。 8．免疫印迹法(Western 提取液中ERKl、ERK2、PKC。VEGF蛋白表达量。 含量。 实验结果 1．血管组织MAPK活性变化 组增高最为明显，通心络抑制MAPK活性，以用药后7d最为明显。 Blot蛋白表达结果 2．ERKl和ERK2的Western 组最为明显。通心络抑制ERK。表达，以抑制用药后7d组最为明显。ERK。 和ERK表达量之间未见明显差异。 3．ERKI和ER墨RT—PCR基因表达结果 以7d组最为明显。通心络抑制mRNA表达，以抑制用药后7d最为明显， ·2· ERK。和ERK：的表达量之间未见明显差异。 4．血管组织PKC活性变化 增高最为明显，通心络抑制PKC活性，以抑制用药后7d组最为明显。 5．PKC。的WesternBlot蛋白表达结果 ． PKC。表达增强，以7d 正常对照组未见PKC。表达，损伤后3d、7d和14d 组最为明显。通心络治疗后PKC。表达降低，以用药后7d组最为明显。 mRNA测定结果 6．PKC。的lit—PCR 表达，7d时最明显。通心络抑制mRNA表达，以用药7d最为明显。 7．ⅦGF的We．stemBlot蛋白表达结果 最为明显。通心络治疗后VEGF表达增强，以用药后7d最为明显。 8．VEGF和RT—PCRmRNA表达正常 组最为明显。通心络治疗后、rEGFmRNA表达增强，以用药后7d最为明 显。 9．血管形态学变化：正常对照组大鼠腹主动脉内皮完整。球囊损伤后 3d，可见内皮细胞剥脱。7d时血管内膜增生，14d后内膜增生更明显，通心 络治疗组内膜增生减轻。 10．电镜结果：正常对照组内皮细胞完整。平滑肌细胞排列整齐。球囊 损伤后内皮细胞受损