饲养层对小鼠胚胎干细胞生长特性影响.pdfVIP

申叉摘要 饲养屡对小鼠籁胎手细胞生长特性的影晌 摘 要 stem cells，ES细胞) 西的：胚胎千细胞(Embryonic 楚觚附嚣前早期疆胎内细胞团(ICM)或附置话原始生 殖细胞(Primordialcells，PGCs)分离克隆瀣来的一 germ 种舆无限增殖姥力积全向分他缝力的干纲胞。具蠢无限增 殖葶B分化的潜能，在体外培莠的条件下，加入饲游廉或慕 些分化挪铡因予，诱蟹分化溺子，可以诱静其离特迩的缨 胞方向分化，戍用于基础实验研究或临床疾癍治疗。Sertoti 缨艟可瑗分泌于缨脆生长霹予(SCF)，掰SCF对ES缨 飚蠢显著魄促分裂挥用，能诱导予细胞进入细藏周期，撬 篱转基医效率，覆虽SCF燕予缨熬生长的瞧一谖掩医予， 缝控案l艟胎发釜过程中发霄不露黔段憋受益。舅窍报道浚 为SCF熊逶过捧穰绷魏猿亡露促进细胞酶生长，可提离 ES缨魏培养鞫蘧系速率，淹建立ES细腿系疆供可纛罄 襁。鉴予娩，本矮轿究攘采糟缏施培养、免疫组亿、MTT 分辑警方法建立起稳定的小鬣成纤维i黉胞镶莽屡及 Sertoli细胞镶养屡，程此基磕上，进行ES细脆酶分离、 培养，黻玩较Sertoli绷脆饲箨露帮成纤维细胞饲赘鼷魏增 穗生长情况及两种饲养层对Es细胞形态及生物学特性的 影响。 材料釉方法：l殿代成纤维细熙及Sertoli纲胞的分鹊 墙养选取昆鞠孕鼠(13。5～14。5dpc)，分离艚甄麴表发 成纤维细胞，0．25％胰酶消他，37。C 15min，低速离心， 中文摘要 趣含10％FCS静DMEM高糖培养蒸重悬缎麓，调整缨稳 浓度，接种于培养瓶。选取16天左右的雄性小鼠5只， 取其睾丸，去自膜，剪簿，O．25％麟酶及0．1％胶原酶潲 化，过200目网，低速离心，用含lO％FCS的DMEM商 耱培养摹重悬细藏，调整细簸浓度，接种子培莽瓶。2取 长满单层细胞的盏玻片，进行HE染色，Giemsa染色，及 受疫组臻化学的方法检测Actin抗体在成纤维细胞和 Sertoli细胞的表达情况。每种细胞分别选取3张切片，每 张切片随机选5个视野。计数总细胞数和阳性细胞数，计 算兔疫缀讫阳性率，结黎进行统计学处理。MTT法测生 长黼线，以时闯为横坐标，吸光度为纵坐标作生长曲线， 比较两种细胞懿生长情况。3饲养瑟的到餐取生长良好 的成纤维细胞及Sertoli细胞，吸撺培养基，加入新鲜配制 的含10；ag／ml丝裂霉素C的DMEM培葬基，37C瓣弯2。5 —3小时。胰酶消化制备单细胞悬液，接种在明胶处理的 嚣魏投。4ES缨脆豹分离培养取3。5—4．5dpc鼹孕鼠，剪 开腹腔，用镊子夹取子宫角顶端，用圆头注射器吸取少量 冲胚液，扶一铡予富热琰瑞注入冲骚液轻轻冲洗子宫囊， 用凹皿收集胚胎，移植入有饲养层的的四孑L板中。4—5 天螽，籍》苻着予培养盈底壁酶生长良好、未分纯现象静鸟 巢状的小鼠内细胞团用灭菌玻璃针拨动，使其与滋养层细 憨鞫成纤维细胞分离。褥用消纯液离散成小细胞团块，移 入新剑各的成纤维细胞翱Sertoli细胞饲养屡上，在37℃， 5％e02饱和湿度的c02培养箱中孵育。5 ES细胞进行碱 性磷酸酶染色，分别测定残纤维细胞和Sertoli缨魏饲养层 上ES细胞的生长曲线。并进行统计学处理。 中文摘要 结果：I成纤维细胞及Sertoli细胞的生长状况及鉴定 成纤维细胞接种半小时后贴壁，可见细小突起长出，细胞 呈梭形，核圆形。24小时后即可连生。刚刚分离出来的 Sertoli细胞呈圆形，细胞贴壁后，可见Sertoli细胞伸出许 多长的突起，细胞之间镶嵌排列。细胞呈大三角形或不规 则形，核大而圆，核中央有1．2个大而明显的核仁。Sertoli 细胞最突出的特征是胞质内可见透亮脂滴。 2HE染色 成纤维细胞均匀分布，呈梭形，突起较长，核蓝紫色，核 内可见染色质散在分布，胞质粉红色。Sert