分子发光-3.pptVIP

* 三、装置与技术 装置流程： 发光反应室 光检测器 信号放大器 显示与记录 发光反应可采用静态或流动注射的方式进行： 静态方式：用注射器分别将试剂加入到反应器中混合， 测最大光强度或总发光量；试样量小，重复性差； 流动注射方式：用蠕动泵分别将试剂连续送入混合器，定时通过测量室，连续发光，测定光强度；试样量大； * 四、化学发光分析的应用 1.广泛应用于大气中O3、NO、NO2、H2O、SO2、CO等组分的检测。 2.鲁米诺—H2O2体系:可测痕量的Cu2+ 、Mn2+、Co2+、V4+、Fe2+、 Fe3+、 Ni2+、Ag+、Au3+、Hg2+等 3. 间接测定某些生物试样 * 五、特点 1. 灵敏度极高 例：荧光素酶和磷酸三腺甙(ATP)的化学发光分析，可测定2?10-17Mol/L的ATP，即可检测出一个细菌中的ATP含量 2. 仪器设备简单 不需要光源、单色器和背景校正； 3. 发射光强度测量无干扰 无背景光、散射光等干扰； 4. 线性范围宽 5. 分析速度快 缺点：可供发光用的试剂少；发光反应效率低（大大低于生物体中的发光）；机理研究少。 * * * 第二章 分子荧光：Fluorescence 分子磷光：Phosphorescence 化学发光：Chemiluminescence molecular luminescence analysis * §2.４ 荧光分析法的应用 1. 工作曲线法 荧光猝灭工作曲线法 Fx F Cs Cx 直接荧光标准曲线法 F Cs Fx Cx 一. 定量分析方法 2. 标准对照法（比较法） cx—待测试液浓度 cs—标准溶液浓度 Ifx—待测试液荧光强度 Ifx—标准溶液荧光强度 If0—空白试剂荧光强度 依据：IF=kc * 荧光分析的灵敏度比紫外-可见分光光度法高103～104. 二. 荧光分析法的灵敏度 荧光分析法可通过提高入射光强度或增大检测器的放大倍数提高灵敏度。 * 紫外-可见分光光度计: 光源 样品池 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 荧光(磷光)分光光度计: 光源 样品池 激发 单色器 检测器 数据处理 仪器控制 发射 单色器 * 在光照下会发生荧光的无机化合物很少，主要利用与有机试剂形成的荧光配合物。如Al3+可与8-羟基喹啉配合。 三. 荧光分析的应用 1. 无机化合物的分析 直接荧光测定法 常测定的元素有：Be、Al、B、Ga、Se、Mg、Zn、Cd与某些稀土元素；测定的灵敏度有些可以达到10-10; 某些元素虽然不与有机试剂形成发荧光的配合物，但是它会与发荧光的配合物争夺配位体，组成不发荧光的配合，使其产生荧光猝灭，由荧光猝灭的强度计算该元素的含量。 较常测定的元素有：F、S、Fe、Ag、Co、Ni、Cu、Mo、W 荧光猝灭测定法 * 2. 有机化合物的分析 　　（1）脂肪族有机化合物 分子结构较为简单，本身能发生荧光的很少，一般需要与某些试剂反应后才能进行荧光分析，如丙三醇与苯胺在浓硫酸介质中反应生成发射蓝色荧光的喹啉，据此可以测定0.1~2μg?mL?1的丙三醇。 　　（2）芳香族化合物 具有共轭的不饱和体系，多能发生荧光，可直接用荧光法测定。 * 一、概述 磷光分析法是以分子磷光光谱来鉴别有机化合物和进行定量分析的一种方法。 磷光分析法在药物分析,临床分析等领域的应用日益发展。 磷光的特点： ① 磷光波长比荧光的大(能量T1S1)； ② 磷光寿命比荧光的长(磷光为禁阻跃迁产生，速率常数小)； ③ 磷光寿命和强度对重原子和氧敏感。 §2.5 磷光分析法 * 二、 基本原理 (一) 磷光的产生和磷光强度 1.磷光是处于激发三重态的分子跃迁返回基态时所产生的辐射。 2.磷光强度: IP=2.3?PI0εbc 在一定的条件下，?p、Ip 、k、b 均为常数，因此上式可写成： Ip=Kc IP—磷光强度 ?P—磷光效率 I? —激发光的强度 ε—磷光物质的摩尔吸收系数 b —试样池的光程 c —磷光物质的浓度 * (二) 温度对磷光强度的影响 1. 随着温度降低，分子热运动速率减慢，磷光增强。 2. 低温磷光(液氮) 由于磷光寿命长，T1的非辐射跃迁(内转换)几率增加，碰撞失活(振动弛豫)的几率、光化学反应几率都增加，从而降低磷光强度。因此有必要在低温下测量磷光。同时要求溶剂： ①易提纯且在分析波长区无强吸收和发射； ②低温下形成具有足够粘度的透明的刚性玻璃体。 常用的溶剂： ① EPA——乙醇+异戊烷+二乙