测定孢子率.docVIP

我在培养嗜热脂肪芽孢杆菌收集芽孢实验用，想请教下怎样通过镜检确定芽孢率，是在显微镜下数芽孢和菌体个数的比值吗？还有就是收集了芽孢后芽孢悬液的浓度是如何确定的呢？ HYPERLINK /bbs/space.php?uid=1116276 \t _blank kissyls HYPERLINK /bbs/space.php?uid=1116276 \t _blank (站内联系TA) 芽孢率，是芽孢数量与总菌量比，一般都估算的。至于浓度，你可以测下OD，OD反应细菌的浓度。 HYPERLINK /bbs/space.php?uid=257601 \t _blank lov_new HYPERLINK /bbs/space.php?uid=257601 \t _blank (站内联系TA) 采用孔雀绿染色法染色后在显微镜下观察计数绿色的孢子占红色菌体、绿孢子的比例。菌悬液浓度要用平板法培养计数。此外说一点，嗜热脂肪芽孢杆菌用固体培养法的得到的芽孢比例比液体培养法高，当然不排除有好的液体培养方法。 HYPERLINK /bbs/space.php?uid=846501 \t _blank oceanjm HYPERLINK /bbs/space.php?uid=846501 \t _blank (站内联系TA) HYPERLINK /bbs/viewthread.php?tid=3476359page=1 \l pid1221773 \t _blank 3楼: Originally posted by lov_new at 2011-08-13 1506:采用孔雀绿染色法染色后在显微镜下观察计数绿色的孢子占红色菌体、绿孢子的比例。菌悬液浓度要用平板法培养计数。此外说一点，嗜热脂肪芽孢杆菌用固体培养法的得到的芽孢比例比液体培养法高，当然不排除有好的 ... 谢谢指教。还想请教个问题，看到文献里面说制备芽孢悬液的方法是，镜检芽孢率达到95%以上时用无菌磷酸盐缓冲液洗下，放入瓶内震摇5min，滤液放于80℃水浴10min，离心取沉淀物加无菌磷酸盐缓冲液配成10的9到10次方的芽孢悬液。这个方法里面配制芽孢悬液浓度就是通过平板培养计数得到的吗？ HYPERLINK /bbs/space.php?uid=257601 \t _blank lov_new HYPERLINK /bbs/space.php?uid=257601 \t _blank (站内联系TA) 这个浓度准确度要求不高可以用浊度仪来测。菌液浓度的计算及稀释法：菌液的浓度可用麦克法伦特氏标准比浊法来测定，方法如下：（1）? ?? ???分别配制1%硫酸溶液及1%氯化钡溶液（2）? ?? ???取口径相等质地相同的试管10支，依下表所示分别将硫酸及氯化钡溶液加入，封固管口，注明号码备用。管号? ?? ???1? ?? ???2? ?? ???3? ?? ???4? ?? ???5? ?? ???6? ?? ???7? ?? ???8? ?? ???9? ?? ???101%BaCl2(ml)? ?? ???0.1? ?? ???0.2? ?? ???0.3? ?? ???0.4? ?? ???0.5? ?? ???0.6? ?? ???0.7? ?? ???0.8? ?? ???0. 9? ?? ???1.01%H2SO4(ml)? ?? ???9.9? ?? ???9.8? ?? ???9.7? ?? ???9.6? ?? ???9.5? ?? ???9.4? ?? ???9.3? ?? ???9.2? ?? ???9.1? ?? ???9.0相当菌数（亿/ml）? ?? ???3? ?? ???6? ?? ???9? ?? ???12? ?? ???15? ?? ???18? ?? ???21? ?? ???24? ?? ???27? ?? ???30（3）? ?? ???将洗下的细菌原液放入与比浊管相同的试管中并予以一定稀释。与标准比浊管相比较，视其浊度相当于比浊管的第几管，然后将比浊管相当菌数乘以稀释倍数即可得到每毫升中所含细菌的数量。如细菌原液1：5稀释后其浊度与第3管相当，则原液每毫升含菌数为9ⅹ5=45亿。（4）? ?? ???菌液的稀释可按下列公式计算：（原液毫升数×原液每毫升含菌数）欲得稀释液浓度— 原液毫升如原液5毫升，每毫升含菌45亿今欲稀释为每毫升含菌10亿的溶液应加生理盐水的毫升数：（5×45）/（10-5）=17.5毫升即细菌原液5毫升加生理盐水17.5毫升稀释即成。但是不同细菌的大小形状都不相同，这个值会有一个较大的变动，仅供参考。准确的值需要平板计数。 HYPERLINK /bbs