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生物制品学实验指导 目录： 实验一：细菌的划线分离与纯培养 实验二：动物的免疫与接种 实验三：灭活疫苗的制备 实验四：凝集抗原的制备 实验五：平板凝集试验 实验六：病料的采集与鸡胚接种 实验七：病毒的收集及效价的测定 实验八：抗原及疫苗的制备 实验九：动物的免疫与接种 实验十：抗体水平的检测 实验一：细菌的划线分离与纯培养 实验二：动物的免疫与接种 一：目的与要求： 1熟悉细菌划线分离的方法及纯培养的意义。 2掌握动物的保定与接种方法。 二：实验内容与步骤： 1种子繁殖： 将冻干菌种接种于普通肉汤培养；（略） 取种子液接种于普通琼脂平板。 点燃酒精灯后，在火焰上方，左手持皿，底朝下盖在上，以无名指和小指托底，拇指、食指和中指将皿盖揭开20°的角度，角度不要过大，以防空气进入污染培养基；但角度过小又不便于操作，且易造成皿盖边缘与接种环接触，导致杂菌污染；右手持接种环，在火焰上灼烧后，取少许菌料或细菌培养物涂于培养基边缘，将接种环上多余的菌料在火焰上烧掉，选择图1所示划线法中的一种进行划线，然后将平皿盖好，倒置于恒温培养箱中培养，37℃条件下培养24h。 图1 细菌分离培养的划线法 2免疫接种：1）小白鼠皮下接种----颈背部、腹侧或后腿内侧，0.1ml/只 用右手抓住小白鼠的尾巴上提，使两后肢悬空，让其两前肢的爪抓住饲养罐的铁丝网盖，然后用左手的拇指和食指抓住小白鼠颈部的皮肤并翻转，使其腹部朝上，将鼠尾巴夹在左手中指与无名指之间，右后腿夹在小手指与手掌之中。右手持注射器，用注射针头轻轻挑起皮肤并刺入皮下，注入接种液时见注射部位微微隆起，注射完拔出针头后，应以酒精棉球按压针孔并稍加按摩。注射量0.1ml/只。 2）兔子肌肉接种----后腿内侧， 0.5ml/只 用左手轻轻压住兔子的头颈部，以拇指夹住兔子的有前肢，食指和中指夹住左前肢，右手紧握腹部和两后肢，使兔子的腹部朝上，由另一人进行接种注射。 注射部位选择动物的股内侧或股外侧，经局部消毒后，将注射针头刺入肌肉深部并推接种液。注射量0.5ml/只。 注：菌苗于下次实验制备 准备 名称 班组 数量 总计 备注 100ml菌液 1瓶 1ml注射器 5 2 10 琼脂平板 5 2 10 小白鼠 5 2 10 家兔 2 2 实验三：灭活疫苗的制备 实验四：凝集抗原的制备 一：目的与要求： 1了解比浊法 2掌握凝集抗原及灭活菌苗的制备。 二：实验内容 1．凝集抗原的制备：用接种环刮下菌苔，用0.4%甲醛灭菌盐水冲洗，并吸入离心管以2500rpm离心10min后，弃上清液，将下沉菌体用0.4%甲醛灭菌盐水悬浮，然后用标准比浊管标定浓度，配制成1—30亿的灭活菌液，置37℃温箱24h，并加入结晶紫用于诊断抗原。 2．铝胶苗的制备（示教）（1）氢氧化铝胶的制备： ① 硫酸铝钾与蒸馏水按1：10混合，60℃加热溶解 ②浓氨水与蒸馏水1：5混合，将② 缓慢加入①中，并不断搅拌，加至PH 7.0~7.2，静置弃上清，用蒸馏水洗3~4次，每次均静置弃上清，测定PH，分装，高压后备用。 （2）将灭活后的菌液与氢氧化铝胶按5：1混合，并分装。取样做安检（接种普通琼脂培养基，37℃，1~2d ；或接种小白鼠）。 准备 名称 班组 数量 总计 备注 接种环、酒精灯、灭菌滴管、灭菌盐水、0.4%甲醛灭菌盐水 离心机、离心管、比浊管、硫酸铝钾、氢氧化铝胶、结晶紫 实验五 平板凝集实验 目的与要求 1．掌握实验动物采血的基本方法 2．掌握平板凝集试验的操作方法与结果判定 二：实验内容 1．家兔的耳缘静脉或心脏采血（略） 2．练习小白鼠尾静脉及眼眶静脉采血法并分离血清 3．血清平板凝集试验与结果判定 取洁净玻片一快，用玻璃铅笔划成小格，并做记号。将待检血清1～2滴滴于洁净玻片上，取已知平板凝聚抗原，加入其中并混合均匀，数分钟后若有可见的凝集现象即为阳性反应。此法简单迅速，常用于细菌鉴定或畜禽传染病的诊断，如布氏杆菌及鸡白痢等。 准备 名称 班组 数量 总计 备注 微量移液器 5 1 5 枪头 小白鼠 5 2 10 玻片 5 1 5 标准阳性对照 抗原、镊子、 实验六：病料的采集与