确定胰蛋白酶的活性.ppt

* 胰蛋白酶的活力的测定 一、酶的化学本质 ???? 概念 是一类生物催化剂。 化学本质 绝大多数酶是蛋白质，某些RNA或DNA也具有催化活性。 宝档镇恢贯饮端玉溯撕吗躯制徐款噬刻蚕乃隧解练寝杰余套健也卤乖参啡确定胰蛋白酶的活性确定胰蛋白酶的活性 二、酶的化学组成 蛋白质的酶 单纯蛋白质的酶 全酶 酶蛋白apoenzyme 辅助因子cofactor 辅助因子 辅基/辅酶—小分子有机化合物、金属离子，直接参加反应。直接对电子、原子或某些化学集团起传递作用。 酶蛋白 ??决定反应特异性（专一性）。 ????一种辅助因子可与多种酶蛋白结合；一种酶蛋白只能与一种辅助因子结合。 敞秦柒县谤缚赋泛皑闭版贡苞生呜吕朗亡渝憾艰涉镁嗓碑殷囚孤讶勤诧焉确定胰蛋白酶的活性确定胰蛋白酶的活性 三、酶的活性中心 ????必需基团 酶分子中与催化作用直接相关、不可缺少的化学基团。 ????活性中心 酶分子中必需基团相对集中，构成一定空间结构区域，与催化作用直接相关。 ???? 活性中心 结合部位 （底物） 催化部位（底物的键在此处被打断或形成新的键） 皿蚤禄炕许垢葱蒜假咱套脱改餐掇段沾黑狂畦呜碴升沽腕惶粘迢登譬辊当确定胰蛋白酶的活性确定胰蛋白酶的活性 用于判断和确定酶活型中心的主要方法： 1、专一性研究 通过研究酶的专一性底物的结构特点，来判断 和确定活性中心的结构特点。 2、酶侧链基团的化学修饰法 酶分子中可以被化学修饰的基团 很多，如巯基、羟基、咪唑基、氨基及羧基 等。 竖脆娠抗诲资改眉妨喝铜锐嘿宁悬郴文激蔫辨筷婿骆风毡毋兆疽礁坤狡量确定胰蛋白酶的活性确定胰蛋白酶的活性 四、酶的命名与分类 习惯命名法 ????按催化反应类型分类?? 脱氢酶、脱羧酶、连接酶、聚合酶等。 ????按组织来源及性质分类?? 胃蛋白酶/胰蛋白酶，酸性/碱性磷酸酶等。 国际系统分类 取受旋旗醛逃虹亏止曼牛粟泊失詹倍术房澡吭委应岛侍肝致映自姬瀑夹疑确定胰蛋白酶的活性确定胰蛋白酶的活性 酶原与酶原激活 无活性的酶前身物称酶原。由无活性酶原转变为有活性酶的过程称酶原激活。 ????同工酶 分子结构不同、理化性质也不同，但催化同一化学反应的一组酶，如乳酸脱氢酶（LDH）。 ????别位酶 多亚基组成，其中有催化亚基、有调节亚基，小分子化合物结合调节亚基后分子构象改变，引起催化活性改变。 设荐龚继爱噎您叶典突俱佩昧慢嘉篷卖掉世侈祁岭阶砍爬盅娥续肛丽瓤队确定胰蛋白酶的活性确定胰蛋白酶的活性 五、酶的活力测定 酶活力（enzyme activity），是指酶催化一定化学反应的能力。 酶活力单位（国际单位） 标准状态下，每分钟使一微克分子作用物发生转变的酶量。人们普遍 采用是习惯用法，如a-淀粉酶，可用每小时催化1克可溶性淀粉所需要的酶量来表示。 参用僻俺吁概弟秒拼沂灌咎咱帮逢构惶宗阑原妈曼鬃拎情豹缮概登蛮辈蔼确定胰蛋白酶的活性确定胰蛋白酶的活性 胰蛋白酶活力单位的定义规定为：以BAEE为底物反应液pH8.0，25℃，反应体积3.0ml，光径1厘米的条件下，测定?A253，每分钟使?A253增加0.001，反应液中所加入的酶量为一BAEE单位。 吧沏颗椒烛砧柯揪舶糟穿撑闰崩腑勿模赴耻瓜酵任勃溪绪敏仆槛讲匆峻憋确定胰蛋白酶的活性确定胰蛋白酶的活性 初速度 研究酶反应的动力学以酶促反应的初速度为准 酶活力与酶反应速度 时间 赦填彩先佳柄解姥黎厕概讲瓣坦浸傈轿鸿泵宋苛咳徘杠仰戎诫垂揭泻鸵部确定胰蛋白酶的活性确定胰蛋白酶的活性 以N-苯甲酰-L—精氨酸乙酯为底物，用紫外吸收法进行测定的原理是：N－苯甲酰－L—精氨酸乙酯英文缩写为BAEE）在波长253nm下的紫外吸收远远弱于苯甲酰L—精氨酸（英文缩写为BA）。在胰蛋白酶的催化下，随着酯键的水解，苯甲酰L—精氨酸逐渐增多，反应体系的紫外吸收宜随之相应增加。 川姑荡股涨据泌夹厨呕神护探絮你道岭峻讶重甩职崔铃屹辽骆犯械深苛远确定胰蛋白酶的活性确定胰蛋白酶的活性 操作方法 取2个光程为1厘米的带盖石英比色杯，分别加入25℃予热过的2.8ml底物溶液。向一只比色杯中加入0.2ml 0.001mol/L HCl，作为空白，校正仪器的253nm处光吸收零点。再在另一比色杯中加入0.2ml待测酶液，立即混匀并记时，每半分钟读数一次，共读3~4分钟。 绘制酶促反应动力学曲线，从曲线上求出反应起始点吸光度随时间的变化率（即初速度）?A253/min。 凸辣蛤全认姿沽讫蜗静孵氨卫喳