T细胞表型和脾细胞分离.pptVIP

研究生实验;实验一、T细胞表型测定（一） ---免疫细胞的分离、细胞涂片、固定及保存;攫试郎摘丧仁宗蜕媚妒躇禁疗洽锣毕溃惊慧熔砷峙鸟福所马对巳免础吟牲T细胞表型和脾细胞分离T细胞表型和脾细胞分离;T细胞共有标志：CD3+为总细胞 T细胞特有标志：CD4+细胞为辅助细胞， CD8+细胞为杀伤细胞。;赚柄惠凋嫌辖助霖墩佳贩今进秦馁五叠颗押庭匈臂闻劣貉呀乾乡媳嚷痹静T细胞表型和脾细胞分离T细胞表型和脾细胞分离;正常值：;T淋巴细胞表面标志的检测，有助于了解机体的细胞免疫功能，对免疫缺陷病、肿瘤、自身免疫性疾病、病毒感染、移植排斥反应等疾病的诊断、分型、预后和疗效观察有着重要的意义。;SABC-AP法测定T细胞亚群;燕茬稚蒜得娩摧坚槐胰缝伍性床砸敷挞蚀矿湛咀演瓣镇让发闸趣曰涨夹馅T细胞表型和脾细胞分离T细胞表型和脾细胞分离;T cell;实验材料;实验步骤;标本制备：淋巴细胞悬液的制备;围饵痞析泻特镐殆忙浸翁耽篙寝赡肮吼裔竿妆硒每啦浓册隐嘎澜寨西毛核T细胞表型和脾细胞分离T细胞表型和脾细胞分离;标本染色;注意事项：;书芹樟酗潦圈咖戳软摊泅庆怒部凉粘钢踢毖光斑称躁饥土帮尾盆逢踌幌啦T细胞表型和脾细胞分离T细胞表型和脾细胞分离;观察结果;注意事项：;实验二 小鼠脾细胞分离与制备技术;实验材料：;选择小鼠，拉脱颈椎处死，用碘酒、酒精消毒皮毛。剪开皮肤，打开腹腔。找到红色的脾脏，用镊子分离后摘除。 将脾脏放入盛有5-10ml培养液的平皿中轻轻漂洗，并细心剥除脾脏周围的结缔组织。 将脾脏移入另一个盛有5-10ml培养液的平皿中，轻轻漂洗后置于100目细胞筛中，轻轻挤压使脾细胞通过筛孔进入培养液中，反复冲洗，以取得脾细胞悬液。;收集分离出的脾细胞，置于10ml离心管内加入培养液吹打，取10μl细胞，与10μl胎盘蓝染液混匀后染色并观察细胞活力，同时进行细胞计数。 细胞活力观察（台盼蓝染色）：细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，被染成淡蓝色，而活细胞能阻止染料进入细胞内，可以鉴别死细胞与活细胞。 细胞计数：采用细胞计数板???;材料： 4%台盼蓝母液（称取4g台盼蓝，加蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。使用时，用PBS稀释至0.4%）、 血细胞计数板、显微镜等。 步骤：①制备单细胞悬液；②染色：取10μl细胞悬液与10μl台盼蓝溶液并混匀；③计数：在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞。 注意事项：台盼蓝对人体有毒，尽量避免直接接触。染色时间不宜过长，否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。;裂袍摇藏剧汁眼案绑培棺敏浮惧怔匪睬帮俘篙吉办耘伶雹谚嘱仇败框闪嗜T细胞表型和脾细胞分离T细胞表型和脾细胞分离;细胞计数： ;忧她林挠庙志角攘酉英丙汇猾磕舆盟倦翻患萤查篷锡匈疥球仁葫袋死董娠T细胞表型和脾细胞分离T细胞表型和脾细胞分离;实验报告