犬β防御素-1真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达.pdfVIP

动物学报 54(5)：897—902，2008 Ac。 rJ2og 血5 cn 犬 Ij；防御素．1真 核 表 达 载 体 的构 建及 其在 HEK293T细胞中的表达* 靳慧君 仲 飞 吴凌娟 解 民 王 微 韩冬梅 河北农业大学动物科技学院，河北 保定 O7l()ol 摘 要 哺乳动物的8．防御素是一类具有广谱抗微生物活性的阳离子小肽。为了克隆和分析犬 p防御素-l基因， 并建立一套在 HEK293T细胞 中高效表达犬 口防御素一1的方法 ，本研究采用 RTPCR方法从犬睾丸组织中扩增出犬 口防御素一1(cBD一1)的cDNA基因，并将其克隆到 pcDNA3．1A载体中，构建了犬p防御素一1基因的真核表达载体 pDNA3．1A．cBD．1，经磷酸钙介导转染 HEK293T细胞进行表达。结果表明：克隆的犬 p防御素一1基因序列与已发 表序列 (GenBank编号 ：NM—oo1024641)的同源性为 99．7％。表达犬 8防御素一1经westem-hlot检测 ，证明构建的 犬 8防御素一1基因表达载体能够在真核细胞 中表达 ，表达产物能够分泌到细胞外 。为进一步研究犬 p防御素的功 能奠定了基础 [动物学报 54 (5)：897—9O2，2(】08]。 关键词 犬 8防御素．1 载体构建 HEK293T细胞 表达 C0nstructi0n0feukary0ticexpressi0nVect0rcarryingcaninep— defensin-lgeneand itsexpressi0n inHEK293T cells JIN Hui．Jun，ZH0NG Fei ，WU Ling—Juan，XIE Min，WANG Wei，HAN D0ng—Mei Col1ege0fAnima1ScienceandTechno10gy，AgriculturalUniversityofHebei，Ba0ding O710O1，Hebej，China Abstract Mammalian8一defen8insaresmaI1cati0nicpeptidesthatp0ssessbmadantimicmbia1andphysi0l0gicalactivities．To 0btainthegenec0nstnlct0fcaninep—defensin—l(cBD．1)，wec1onedcBD一1geneandestablishedameth0dtoexpresscBD一1in HEK293Tcells．ThecDNA encodingcBD一1wasampli矗edf_r0m caninetesticu1artissuesbvRT—PCR，andthecBD—lgenewas insertedintoeuka o￡jcexpressionvectorpcDNA3．1A．Then，therecombinantpcDNA3．1A cBD一1plasmjdsweretrans ctedinto HEK293Tcellsusingcalcium phosphate．TheresuhsshowedthatthesequenceofcBD．1geneamplifiedinthisresearehwasalmost identjca1t0thepub1ishedsequence (GenBankaccessjonnumber：NM ()o1024641)sjncetheh0mol0gybetweenthem was 99．7％ ．TheexpressedcBD—lproteinisolatedf_r0m cellculturemedium wasdetectedbyWestem—blotsuggestingthatcBD—lgene couldbesecretive1yexpressedineuka 0ticce11s．Theseresulfsalsoprnvideabasisf0rfurtherinvestigation0fcanjnep．defensin fIlncti0nIAc￡nZo0如g拈乜Sncn54 (5)：897—902，2008f． Keywords CanineB—defensin一1，Vect0rconstmcti0n，HEK293Tce11s，Expression 防御素 (Defensin)是广泛分布