通用引物PCR研究进展.pdfVIP

维普资讯 · 522 · 国际检验医学杂志2008年6月第29卷第6期 IntJLabMed，June2008，Vo1．29，No．6 · 综 述 · 通用引物 PCR研究进展 袁晓辉 曲章义 王迎晨 陈晶 综述 曲章义 审校 【摘要】 通用引物 PCR是应用与不同序列的保守区互补的通用引物 ，来进行 PCR扩增 ，它能够 高通量地对相关微生物或其亚型进行检测与鉴定分型，是一种简便、快速 、灵敏、特异的鉴定分型方 法 ，目前广泛应用于病毒、细菌、支原体及真菌等微生物的检测与鉴定 。 【关键词】 聚合酶链反应 ； DNA 引物 ； 保守序列； 蛋 白质亚型； 临床实验室技术 中图分类号：R446．61；R446．5 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673—4130(2008)06—52203 通用引物 PCR(generalprimersPCR或 universalprimers 性 内切酶片段长度多态性等 ，可 以对相关病原或其亚型作 出鉴 PCR)也 叫共 同引物 PCR(consensusprimersPCR)或者共 同 定，在流行病学调查、临床病原学等方面具有很高的应用价值。 区 PCR(consensusPCR，C-PCR)，是利用不同核酸序列之间存 通用引物 PCR方法大大减少 了临床与实验室 的工作量 ， 在的高度保守区来设计通用引物 ，扩增相应的核酸序列的一种 简化 了临床检测与治疗 ，加快 了实验进程 ，可 以更好地应用于 方法E1]。近年来 ，通用引物 PCR在微生物 的检测与鉴定分型 各种微生物的快速检测和鉴定分型 。 方面应用广泛 ，与普通的 PCR方法相 比，具有简便 、快捷 、高通 通用 引物 PCR的原理与方法 量 的优点，能够通过一对引物一次扩增反应检测出所有相应 的 核酸序列 。现就其特点、原理和方法以及在微生物的检测与鉴 1．序列分析与引物设计 由于通用引物 PCR用于扩增 定分型方面的应用作一综述 。 两段保守序列之间的DNA片段 ，因此在设计引物时，除了要 求符合引物设计 的一般原则外，引物还必须要求设计在高度保 通用引物 PCR的特点 守的序列区内，即与序列保守区互补 ，且该保守区必须是特异 常规 的PCR方法是特异地用于扩增两段 已知序列之间的 性的，即只存在于此类待检测 的相关微生物或所有亚型中，而 DNA片段 的方法 ，在微生物 的检测与鉴定方面 ，常规 的PCR 不能存在于其他微生物 中。所 以通用引物 PCR的序列分析与 方法是用某种微生物或亚型的特异性 引物去扩增该类微生物 。 引物设计是非常重要 的，关系到后期实验 的成败 。一般情况 但如何对一类相关的不 同微生物或者一类微生物 的不 同亚型 下 ，从 GenBank上获得病毒或细菌 的基 因序列或相应的氨基 作出高通量 的检测与鉴定 ，通用引物 PCR就是基于这一 点提 酸序列，取其适合作分析 的区段 ，利用生物信息学软件 (如 出来 的一种能够检测大量样 品的高通量 PCR方法 ，即能将所 ClustalX、Bioedit、DNAMAN等)，应用全局 比对算法 ，进行多 有的一类相关细菌或病毒 ，或者所有一类物种 的亚型，用一对 重 比对并找到其保守区来设计引物 ，是一种可行且有效的方 通用引物或者称为共 同区引物作一次 PCR反应完成检测 ，它 法 ，如王鹏等[2]用生物信息学软件 DNAMAN对 16个不 同型 利用这些不同类型的病毒或细菌，或其不同亚型之间存在的高 别来 自NCBI数据库中的HAdV六邻体氨基酸