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现代生物技术专题报告 小分子RNA的相关研究 小组成员：吕瀛、周驹俊、陈志球 陈婕、薛宁 * Company Logo Contents 小分子RNA研究方法 小分子RNA的定义与分类 小分子RNA的功能 小分子RNA的研究现状与前景 小分子RNA应用中存在的问题 * Company Logo 编码RNA RNA 非编码RNA * Company Logo 近20 年来，非编码性小RNA 分子（non-coding small RNA）的发现和功能研究，大大改变了人们对RNA 分子的认知，也极大深化了人们对基因表达调控的理解。非编码性小RNA 分子主要指长度为20～30个核苷酸的内源或外源RNA 分子，亦有研究者将长度大于70 个核苷酸的非编码RNA分子也列入其中。 * Company Logo 微小RNA 小干扰 RNA piRNA 较长的 非编码RNA 小分子RNA …... * Company Logo 较长的非 编码RNA 核内小RNA （snRNA） 核仁小RNA （snoRNA) 胞质小RNA （scRNA) 催化性RNA （核酶） 其它类型的 非编码RNA * Company Logo Cnki相关文章数 * Company Logo 小分子RNA的功能 Company Logo 传统功能 新研究功能 * Company Logo Company Logo 用到的工具酶有： 碱性磷酸酶 T4多核苷酸激酶 T4 RNA ligase 逆转录酶等 通过总RNA提取，之后跑PAGE胶而得到纯化，得到200nt的核苷酸条带 通过5‘Adaptor设计正向引物 通过3‘Adaptor设计反向引物 新microRNA基因的克隆 小分子RNA富集纯化 RT-PCR克隆及测序 末端修饰及连接 已知序列 * Company Logo . 新microRNA基因的克隆 Total RNA PAGE胶分离 OH 3’ 5’ P 5’ P OH 3’ 5’ P 5’ P 5’ P 5’ P OH 3’ OH 3’ 5’ 0H Phosphatase T4RNA ligase OH 3’ 5’ P 3’ Adaptor 5’ 0H 5’ 0H OH 3’ 5’ 0H OH 3’ T4RNA polynuleotide kinase OH 3’ 5’ 0H OH 3’ OH 3’ OH 3’ 5’ P OH 3’ OH 3’ OH 3’ 5’ P OH 3’ 5’ Adaptor * 新microRNA基因的克隆 OH 3’ 5’P 5’ Adaptor 3’ Adaptor Reverse transcription PCR 5’P 5’P 3’ Adaptor 5’P 3’ Adaptor 5’P OH 3’ 5’P 酶切位点 OH 3’ 5’P OH 3’ 5’P OH 3’ 5’P OH 3’ 5’P OH 3’ 5’P 酶切位点 酶切位点 酶切位点 PCR 扩增克隆 得到cDNA克隆、酶切、质粒连接、表达分析等 * Company Logo Micro RNA主要研究技术手段 * Company Logo Micro RNA主要研究技术手段 生物信息学方法对基因功能进行预测 杂交技术对Micro RNA表达的研究 通过敲除Micro RNA的Dicer 酶研究Micro RNA 敲除的表型 Micro RNA 过表达 Micro RNA 表达敲减等技术 * Company Logo * Company Logo