低温胁迫对幼苗期棉花根系ADHa与BADH表达的影响.pdfVIP

江苏农业科学 2013年第41卷第 8期 一 37一 沙向红，严建萍．低温胁迫对幼苗期棉花根系ADJ‰与BADH表达的影响[J]．江苏农业科学，2013，41(8)：37—38 低温胁迫对幼苗期棉花根系 表达的影响 沙向红，严建萍 (南通高等师范学校，江苏南通226001) 摘要：海棉7124号棉花种子在常规花盆土壤中种植发芽，待棉花幼苗长至2叶 1心时，将其随机分为对照组和试 验组，分别置于常温(25℃)和低温(5℃)植物培养箱中，光照／黑暗 12h交替培养，每天适量浇水。各组分别在0、 l2、24、48、96h取根尖组织，并提取 RNA，以逆转录、荧光定量PCR法测定亚型乙醇脱氢酶(ADHa)和甜菜碱醛脱氢酶 (BADH)基因的表达。结果显示，在各时间点下，低温组ADHa和BADH表达量均明显高于常温组。说明幼苗期棉花 根系ADHa和BADH表达量在低温胁迫条件下升高与低温抗逆性有关。 关键词：棉花；幼苗期；低温胁迫；ADHa；BADH；表达 中图分类号：s562．01 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2013)08—0o37一o2 低温是影响作物分布和产量的最主要生态因子之一，也 AppliedBiosystems公司生产。 是农业生产田间条件下经常遇见的一种作物生长逆境。在低 1．2 方法 温胁迫下，作物体内的主要生理过程都会受到影响，植物光合 1．2．1 棉花幼苗的培养及低温处理 棉花种子置常规花盆 作用降低，呼吸作用增强，蛋白质合成受阻，消耗增强，植物处 土壤中发芽，待棉花长至2叶1心时，随机分为室温对照组、 于饥饿状态。因此，低温会严重影响植物正常生长发育，甚至 低温处理组，分别置于常温(25℃)和低温(5℃)植物培养箱 会导致植物死亡，同时还会诱导相关多个基因的表达，以提高 中。通过培养箱 自动控制进行光照／黑暗 12h交替培养，每 植物的抗逆性。棉花是长江中下游一带春季广泛种植的农作 天适量浇水。各组分别在0、12、24、48、96h时取根尖组织， 物 ，低温又是这一地区早春常见的气象特点，在棉花发育的初 自来水下冲洗干净，立即提取RNA。 期阶段会影响棉花幼苗生长，对其生长产生不利影响，但棉花 1．2．2 总RNA的提取 剪取各组的根尖 4～5根，每根约长 对低温逆境的响应表现出积极主动的应激过程。乙醇脱氢酶 1em，置于匀浆器中，加入 RNAisoPlus1mL抽提液研磨 ，静 (alcoholdehydrogenase，ADH)和甜菜碱醛脱氢酶 (betaine— 置 5rain，加入 0．2mL三氯 甲烷，振 荡混匀，静置 5min， aldehydedehydrogenase，BADH)都与植物的抗逆性相关。本 12000r／min离心10min，吸取上清液，加入等体积异丙醇， 研究通过海棉7124号亚型乙醇脱氢酶 (ADHa)和BADH基因 混匀，室温静置 10rain，12000r／rain离心 10min，弃上清液， 在低温胁迫下相对表达量的变化，研究低温对幼苗期棉花生 用75％ 乙醇洗涤沉淀，12000r／rain离心5min，弃乙醇，待剩 长发育和生理特性的影响，以期为研究棉花作物抗寒机理提 余乙醇完全挥发后，用适量的DEPC水溶解RNA。 供一些理论依据。 1．2．3 反转录 取各个样品的总 RNA1IxL进行反转录，依 次加入2 L5xBuffer、0．5tzLMix、0．5 随机引物、1 1 材料与方法 R