鸡Ⅹ期胚盘细胞体外培养.PDFVIP

动物学报 　48 (4) :549～553 , 2002 A cta Zoologica S inica 　　　　　 　 鸡 Ⅹ期胚盘细胞体外培养 杜立新　尹春光 ( 山东农业大学动物科技学院, 山东 泰安 271018) 摘 　要 　为证实经遗传修饰的鸡 X 期胚盘细胞具有参与受体胚胎发育和形成嵌合体的能力 , 本研究将由鸡 X 期 胚盘制成的细胞悬液与经脂质体包埋的抗鸡传染性支气管炎病毒基因重组质粒 PGS1 共孵育后 , 直接显微注入同 ( ) ( ) 期受体胚盘 140 枚 ; 或对转染后供体细胞进行 G 抗性筛选后显微注入同期受体鸡胚盘 140 枚 ; 或将供体 418 GS1 ( ) 细胞体外培养 48 h , 再与脂质体P 复合物共孵育后显微注入同期受体鸡胚盘 190 枚 , 制备转基因嵌合体鸡 , 并应用 PCR 和 RAPD 方法 , 对鸡胚和雏鸡不同组织或血液中的 DNA 进行检测。结果表明 : 直接注射组孵化率 ( ) ( P 0 01) ( ) ( ) 57 % 显著 高于 G 筛选处理组 14 % 和培养 48 h 处理组 2 1 % ; G 筛选处理组不同胚龄 418 418 鸡胚组织、器官中外源 DNA 的 PCR 检测阳性率均高于其它二个组。实验结果证明 , 体外培养 48 h 并经遗传修 饰的胚盘细胞仍然具有形成嵌合体的能力 , 利用早期胚盘细胞途径制备转基因鸡是可行的。 关键词 　鸡 　胚盘细胞 　体外培养 　PCR 扩增 　RAPD 　　鸡具有个体小、世代间隔短、种群维持费用 鸡奠定基础。 低、生产力高、蛋中成份易于分离提纯等特点。因 1 　材料和方法 此 , 转基因技术对于鸡无论在其生产性能的改良、 抗病育种 , 还是在其蛋中生产异源蛋白质均具有独 11 　材料和试剂 特的优越性和光明的前景。然而 , 由于鸡独特的生 种蛋 : 受体为海兰白 ( 显性白羽 , 基因型 : 殖生理和解剖学特点 , 使得转基因鸡研究明显滞后 IICC) , 供体是罗曼 ( 金银羽 , 基因型 : S/ s) , 每 于哺乳动物。为了解决鸡基因组操作的问题 , 国内 批实验每一处理为 15～20 枚供体受精蛋 , 150 ～ 外学者先后进行了各种方法的尝试 , 但至今仍然没 200 枚受体受精蛋 , 实验群规模为 10 只供体鸡 , 有一条行之有效的途径。胚胎干细胞具有组建种系 30 只受体鸡 , 所有种蛋均来自该群体。代用蛋壳 ( ) 和体细胞组织的全能性 ,