拉曼光镊流式细胞仪的构建及其在地中海贫血分析中的应用.pdfVIP

第38卷 分析化学(FENⅪHuAXlJE)研究报告 第11期 of 1578～1582 2010年11月 Chine眈JoumalAnalyticalCheⅡlistry DoI：10．3724／SP．J．1096．20lO．01578 拉曼光镊流式细胞仪的构建及其在地中海贫血分析中的应用 毛丽华1’2 刘军贤2 陈萍3 梁建平1 王桂文1 姚辉璐“ 1(广西科学院，南宁530003)2(广西师范大学物理科学与技术学院，桂林541004) 3(广西医科大学，南宁530021) 摘要为自动检测和分析地中海贫血(地贫)红细胞内部的物质变化情况。建立拉曼光镊．微流控芯片自动 化系统平台。应用此装置收集口地贫红细胞和正常红细胞的拉曼光谱，并对其进行多元统计分析，从拉曼特 征峰(1004，1130，1450，1545，1604和1618cm。1)的数据统计分析可见，口地贫红细胞的血红蛋白分布比正 常红细胞广，平均强度差在6％以内。采用主成分分析法，可较好地将正常红细胞和口地贫的红细胞区分开， 从载荷图可以更明显的看到它们的变化情况。此装置实现了快速、准确、非损伤的全自动化检测，为生物学的 研究和医学诊断提供新的研究手段。 关键词拉曼光镊；微流控芯片；流式细胞仪；JB地中海贫血 1 引 言 地中海贫血(简称地贫)是遗传性溶血性贫血，目前尚无法根治，主要见于地中海和东南亚地区。 我国广西是地贫的高发区，a．地贫发生率达14．95％。重型地贫胎儿的降生对家庭和社会都是沉重的 负担，唯一有效的避免手段是在地贫高发区筛查地贫基因携带者，进行产前诊断。常规方法是基于大量 细胞群体的检测，操作繁琐，工作量大，得到的是群体的信息，无法得到单个个体细胞的信息。彭立新等… 采用傅里叶红外光谱结合水平衰减全反射(FnR．HATR)技术用于地贫诊断的定量与定性方法研究。 流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它的基本原理是采用流体动力学聚焦以保证细 胞按同一方式逐一通过激光束(检测区)，当样品中的细胞经过流动室的检测区时，激光束即可检测到 细胞信号，包括细胞的散射光以及细胞上标有的荧光染料发出的激光旧o。 微流控芯片技术是在尺度为几个或上百微米的通道中操纵纳升或纳升以下流体的技术，目前已广 泛应用于生命科学、农学、临床医学等【3。1领域。化学合成、生物分析及光学的发展极大地推动了微流 控芯片技术的进步，而与其配套的高灵敏度微型检测系统研究备受关注。 近年来，拉曼光镊得到广泛的应用【6~8]。本研究克服了现有的拉曼光镊系统存在的不足一J，如实验 操作繁琐，耗时较长，易出现细胞被重复检测的现象等，将拉曼光镊与微流控芯片技术联用，构建了全自 动化平台系统。有关拉曼光镊与微流控芯片技术联用已有报道。如zh肌g等¨叫以芯片为混合及分析 样品的容器，分析反应过程产物的拉曼光谱。Lau等¨¨根据细胞的特征拉曼光谱对不同的细胞进行分 选。本研究很好地控制了流体速度，用图像识别的方式判断细胞是否被俘获，通过程序实现俘获细胞、 收集光谱、释放细胞的自动化操作，并应用此装置收集地中海贫血(地贫)和正常血红细胞的拉曼光谱。 2 实验部分 2．1实验装置 拉曼光镊．微流控芯片装置如图l所示。从二极管激光器中发出波长为780啪的激光，经过滤波 片滤掉干扰光，进入倒置生物显微镜。显微镜是物镜数值孔径为1．30，放大倍数为100倍的油浸物镜。 mm，发散角o．002 激光束到达物镜前的光斑直径约6 rad，经物镜聚焦后在焦点附近形成了单光束光势 阱。细胞被聚焦的激光束的辐射压力囚禁在焦点附近，同时该激光也用于激发被囚禁细胞的拉曼散射。 2010旬l珈收稿；2010J05JD5接受 本文系国家自然科学基金(No．6086∞02)和广西研究生教育创新项目基金(No．2∞9106020r702M37)资助 }E·mail：y∞hl@tⅧ．咖 万方数据 第11期 毛丽华等：拉曼光镊流式细胞仪的构建及其在地中海贫血分析中的应用