豆粕中尿酶活性测定.docVIP

豆粕中酶活性测定 　　尿酶(Urease)：生大豆中含不等量尿酶，尿酶本身无营养意义，但是它与抗胰蛋白酶含量接近，而且遇热失活的程度与抗胰蛋白酶相似，因此以尿酶活性用作豆粕加工适宜度的简单估测指标。但是加工适宜度不仅取决于畜种、年龄和畜禽阶段，也取决于大豆品种及储存状况。严寒损伤的大豆储存6个月以上，则抗胰蛋白酶含量会增加，但是未受损伤的大豆就没有这种现象。 　　附　录　A大豆制品中尿素酶活性测定方法 　　GB/T 8622-1988 　　A.1　适用范围 　　本标准适用于由大豆制得的产品和副产品中尿酶活性的测定。本法可确认大豆的湿热处理程度。 　　A.2　定义 　　本标准所指尿素酶活性定义如下： 　　在(30±0.5)℃和pH7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。 　　A.3　原理 　　将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min，尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。 　　A.4　仪器设备 　　A.4.1　样品筛：孔径200mm; 　　A.4.2　酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置; 　　A.4.3　恒温水浴：可控温(30±0.5)℃; 　　A.4.4　试管：直径18mm，长150mm，有磨口塞子; 　　A.4.5　精密计时器; 　　A.4.6　粉碎机：粉碎时应不生强热(例如球磨机) 　　A.4.7　分析天平：感量0.0001g; 　　A.4.8　移液管：10mL。 　　A.5　试剂和溶液 　　A.5.1　尿素：分析纯; 　　A.5.2　磷酸氢二钠：分析纯; 　　A.5.3　磷酸二氢钾：分析纯; 　　A.5.4　尿素缓冲溶液(pH6.9至7.0)：4.45g磷酸氢二钠和3.40g磷酸二氢钾溶于水并稀释至1000mL，再将30g尿素溶在此缓冲溶液中，可保存1个月。 　　A.5.5　盐酸：分析纯，c(HCL)=0.1mol/L溶液; 　　A.5.6　氢氧化钠：分析纯，c(NaOH)=0.1mol/L标准溶液。 　　A.6　试样的制备 　　用粉碎机将10g试样粉碎，使之全部通过样品筛。对特殊试样(水分或挥发物含量较高而无法粉碎的产品)应先在实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失重计算在内。 　　A.7　测定步骤 　　称取约0.2g已粉碎的试样，称准至0.1mg，转入试管中(如活性很高只称0.05g试样),移入10mL尿素缓冲溶液，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于(30±0.5)℃恒温水浴中，准确计时保持30min。即刻移入10mL盐酸溶液，迅速冷却到20℃。将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，立即用氢氧化钠标准溶液滴定至pH4.70。 　　另取试管作空白试验，移入10mL尿素缓冲液，10mL盐酸溶液。称取与上述试样量相当的试样，也称准至0.1mg，迅速加入此试管中。立即盖好试管并剧烈摇动。将试管置于(30±0.5)℃的恒温水浴，同样准确保持30min，冷却至20℃，将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标准溶液滴定至pH4.70。 　　A.8　测定结果的计算 　　A.8.1　计算方法 　　以每分钟每克大豆制品释放氮的毫克量表示的尿素酶活性U，按下式计算： 　　14×c(V0-V) 　　30×m 　　U= 　　式中：c ——氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L; 　　V0 ——空白试验消耗氢氧化钠溶液体积，mL; 　　V ——测定试样消耗氢氧化钠溶液体积，mL; 　　m ——试样质量，g。 　　注： 若试样经粉碎前的预干燥处理时，则 　　14×c(V0-V) 　　30×m 　　U= 　×(1-S) 　　式中：S——预干燥时试样失重的百分率。 　　A.8.2　重复性 　　同一分析人员用相同方法，同时或连续两次测定结果之差不超过平均值的10%，以其算术平均值报告结果。 　　附　录　B 大豆制品中尿素酶活性快速检验 　　将1份尿素、5份水，10份豆粉或豆粕置于小塑料袋中，封口30秒，如豆粕中有尿酶存在，它会将尿素转化为氨，打开袋口可闻到氨气，正常豆粕无气味。 　　附 录 C 大豆制品中尿素酶活性酚红法检测 　　取约0.02g粉碎好的试样,放入试管中,加5mL水、0.02g尿素和2滴0.1%的酚红乙醇(20%)溶液,振摇10秒。观察溶，液颜色并记录时间。1min内变粉红色，酶活很强;1～5min 变色，活性强;5～15min，略有活性;15～30min，无活性;10min不变色者，合格。 期待值 范围 生黄豆 加热过度 lastrow: yes 尿素酶pH增值法 0.3↓ 0.05~0.20 1.75 0.05↓