积雪甙对造模小鼠成纤维细胞抑制作用光镜电镜观察的实验探究.pdfVIP

Ys珏遗6甚u 测匕中塞学院硕士学位论文 积雪甙对造模小馘成纤维细胞抑稍诈 册光镜电镜观察魄实验研究‘ 研究生姓名： 余艳 指导教师姓名。职称： 芏玮纂副主任医师 学科、．专业一名。弥： ‘申西医结合临床 。～ 研。究 方 同： 中西医结合防治皮肤病及中医美容 ：OO六年五月 郑重声明 本人的学位论文是在导师指导下独立撰写并完成的，学位论文没 有剽窃、抄袭、造假等违反学术道德、学术规范和侵权行为，本人愿 意承担由此而产生的法律责任和法律后果，特此郑重声明。 学位论文作者(签名)：佘礼 2006年5月10日 湖北中医学院2006届硕士毕业生论文 中 文摘 要 1．目的： 本研究拟从动物模型中，探讨积雪甙治疗炎症后成纤维细胞修复的作用机 理，通过对光镜和电镜的观察了解在炎症发展过程中成纤维细胞显微结构和超微 结构的改变，为积雪甙在临床广泛应用提供理论基础． 2．实验材料： 2．1药物与试剂：积雪甙，上海现代浦东药厂有限公司生产，批号050401，规格 6mg／片：四环素，成都景华制药厂生产，批号050302，规格0．259／片；痤疮丙 酸杆菌，由澳大利亚细菌实验室提供；10％甲醛溶液，由武汉大学医学院病理免 疫室提供；2．5，l戊二醛由武汉大学医学院电镜室提供． 2．2实验动物：昆明纯系小鼠40只，雌雄各半，体重28±29，鼠龄2个月，由华 中科技大学同济医学院实验动物部提供． 2．3仪器：光电双目显徽镜1台，由武汉大学医学院免疫病理实验室提供；细胞 计数器1个，由武汉大学医学院免疫病理实验室提供。LKB2v型超薄切片机，日 立H2600型透射电镜由武汉大学医学院电镜实验室提供． 3．方法： 3．1痤疮丙酸杆菌培养：冻干痤疮丙酸杆菌以脑心漫液滓解后，室温下放置数分 钟，取少许溶液培养于5X血液琼脂，厌氧环境下35—37℃培养5—7天，用生理盐 水洗涤3次，调整痤疮丙酸杆菌浓度为2×101。／ml备用。并经镜下检验确定为蓝 色棒状杆菌． 3．2造模：小鼠背部剪毛，约l×l厘米大小，每只小鼠三处，将已培养的痤疮 丙酸杆菌生理盐水稀释两次后接种注射到小鼠的皮下，每一点注射2000万单位 痤疮丙酸杆菌，注射后每日观察小鼠局部皮肤的变化．(《实验动物和动物实验技 术》中国中医药出版社256) 3．3分组：将40只实验小鼠随机分为四组，积雪甙+四环素组；积雪甙组：四环 索组；空白对照组；每组10只． 3．4灌胃：在造模后第7天，积雪甙+四环素组给予积雪甙混悬液O．25m1 (1．5mg／m1)灌胃．空白对照组给予生理盐水o．25ml灌胃．按规定剂量于每日 上午8—10时给药．(《实验动物学》湖北科学技术出版社277常用实验动物及人 的体表面积比例表) 3．5光镜标本悄作及观察：在追模后第3、7、10、14、21天切除小鼠皮肤，10％ 甲醛固定，按石蜡切片常规处理，用HB染色，在光镜下观察接种部位成纤维细胞 造模后显微结构的改变，并在低倍镜下，用测徽尺计数成纤维细胞总数． 3．6．电镜标本制作及观寮：在造模后第3、7、14、21天切除小鼠皮肤，2．5％戊二 醛前固定，1％饿酸固定，梯度乙醇脱水，树脂包埋，半薄切片定位，LKB2V型超薄 切片机切片，日立H2600型透射电镜观察，观察接种部位成纤维细胞内细胞器结 构的变化． 3．7统计方法：治疗前后成纤维细胞的计数比较采用t检验． 4．结果： 局部接种注射后，第2天观察四组小鼠，可见接种部位皮肤明显肿胀，第3 天光镜观察：表皮及真皮内炎细胞弥漫性浸润，以大量嗜中性白细胞为主，部分 为单核细胞和淋巴细胞，组织水肿明显，肌间隙及肌层中炎细胞漫润．第7天时 润北中医学院z006届硕士毕业生论文 成纤维细胞呈星形突起，细胞较大，大部分胞质嗜碱性，细胞核呈椭圆形，细胞大