qpcr实验原理、流程及应用.pdf

定量PCR技术原理、实验设计、应用 洪来法 Field Applications Specialist 2011年1月11 日星期二 在分子水平对标本的检测方法 1：蛋白水平检测 如Western Blot、ELISA 2：核酸水平检测 如Northern 、sequence、PCR、qPCR 3：其它 如多糖水平检测 PCR 技术 PCR (Polymerase Chain Reaction)—聚合酶链式反应 1985年K. Mullis发明PCR技术，并因此获得诺贝尔化学奖。 1988年伯乐公司推出了第一台PCR仪器 PTC-100 1998年伯乐公司推出了第一台实时定量PCR仪器 iCyclerIQ Icycler IQ PTC-100 PCR 原理三步曲 第一步：加热变性 靶序列 靶序列 PCR 原理三步曲 第二步：退火，引物特异地与靶序列结合 靶序列 3’ 5’ 5’ 3’ 引物1 引物2 3’ 5’ 5’ 3’ 靶序列 PCR 原理三步曲 第三步：延伸，DNA聚合酶在引物引导下，按照靶序列复制 靶序列 3’ 5’ 5’ 3’ 引物 DNA 聚合酶 PCR 原理 靶序列的大量扩增 循环数 扩增子数 (拷贝数) 1 2 1 循环= 2 扩增子 2 循环 = 4 扩增子 2 4 3 循环 = 8 扩增子 3 8 4 循环 = 16 扩增子