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从植物叶提取DNA
植物叶片DNA的提取 DNA extraction;实验原理;实验材料和试剂;实验仪器;离心机;各种型号的微量移液枪;研钵;实验步骤:
水稻幼苗或叶片0.1-0.2g, 剪碎, 置研钵中,加入1mL提取缓冲液,
研磨成浆;
2. 吸入1.5mL EP管中,剧烈摇动混匀;
3. 60℃水浴保温30-60min,不时颠倒混匀;
4. 室温下10000rpm离心5min;
5. 小心吸上清于新的离心管中,加入等体积氯仿,剧烈震动;
6. 室温下10000rpm离心5min;
7. 小心将上清吸入新的离心管中;
8. 加入1倍体积异丙醇,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。
8000rpm离心5min ,弃掉上清;
75%酒精洗一次,晾干沉淀;
10. 加入5μL RNaseA(10μg/μL), 37℃ 10min, 除去RNA。
11. 加50-100μl水融解,-20贮存。 ;1. 植物叶子0.1- 0.2g, 剪碎置预冷研钵中 ;2. 吸入1.5mLeppendorf 管中,摇动混匀 ;3. 60℃水浴保温30-60min;4. 10000rpm离心5min;5. 吸上清于新的离心管中,???入等体积氯仿,颠倒混匀;6. 再次10000rpm离心5min; 将上清小心吸入新的离心管中; ;7. 加入1倍体积异丙醇,-20 ℃放置10min,出现絮状DNA沉淀;
随后8000rpm离心5min ,弃掉上清;75%酒精洗沉淀一次晾干沉淀;加5μL RNaseA (10μg/μL), 37℃ 10min, 除去RNA;
加50-100μL的TE Buffer ,取1-5μL电泳检测;其余-20 ℃ 贮存备用。;DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳(例图) ;实验注意事项;思考题:
为什么构建DNA文库时, 一定要用大分 子DNA?
2. 如何检测和保证DNA的质量?
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