解说分子生物学研究法.pptVIP

3．分子克隆的主要方法 （1）构建cDNA、核DNA文库，应用现有核酸探针分离新的目的基因；（2）差式杂交(differential screen)和扣除杂交(subtractive hybridization)技术；（3）DD-RT-PCR法及差别显示技术；（4）差别分析法 (RDA法，即Representational difference analysis）；（5）酵母双杂交体系Two-hybrid system；（6）图位克隆法（map-based cloning）与染色体步移 （genomic DNA Walking）。? * 习惯上，人们用克隆表示由同一物种具有相同基因型的两个或多个个体组成的群体。所以，从同一受精卵分裂而来的单卵双生子（monozygotic twins）便属于同一克隆。细胞学上，克隆是指由同一个祖细胞（progenitor cell）分裂而来的具有同一遗传背景的子细胞群体。分子生物学上，把将外源DNA插入具有自主复制能力的载体DNA中，使之得以自主复制和永久保存的过程叫做分子克隆。 文库筛选与基因丰度有关。高丰度基因，如蚕丝心蛋白，卵清蛋白等在某些特定组织中可占细胞总mRNA量的50-90%，非常容易被分离。低丰度基因，一般在细胞中只有10-20个拷贝，哺乳动物细胞中可含10,000到40,000种不同的mRNA，如果要达到99%的期望值