动物细胞工程制药分解.ppt

最早于1984年由英国科学家Spier发明。 将细菌发酵罐进行改进。 该装置的主要特点是可以避免在向培养基中通气时气泡直接损伤细胞。 同时在采用微载体系统培养时，微载体不会被由于通气所产生的泡沫滞留在气液界面中。 笼式通气搅拌器的改进-- NBS装置 作为对最初设计的笼式通气搅拌器的改进，NBS装置中分别包括笼式的通气腔和消泡腔。 气液交换在由200目不锈钢丝网制成的通气腔内实现；而在鼓泡通气过程中所产生的泡沫经管道进入液面上部的由200目不锈钢丝网制成的笼式消泡腔内，泡沫经钢丝网破碎分成气、液两部分，达到深层通气而不产生泡沫的目的。 模拟体内的三维培养状态，细胞接种在中空纤维的外腔，利用中空纤维模拟人工毛细血管供给营养，使细胞高密度生长 材料有硅胶，聚砜，聚丙烯等，为半透膜 二 动物细胞生物反应器的检测系统 1.培养过程需检测的物化参数 温度、pH、搅拌速度、溶氧等 2.主要参数的检测和控制方法 （1）温度 （2）pH （3）溶氧：原理；增加溶氧的措施 （4）搅拌 （5）进出液流量：注意事项 第八节 动物细胞产品的纯化方法和质量控制 一、常用的纯化方法 1.离心 2.离子交换层析 3.凝胶过滤 4.亲和层析 5.盐析和有机溶剂沉淀 6.透析 7.高压液相层析 二、动物细胞产品的质量要求 1.对工程细胞的要求 2.对生产工艺的要求 3.对产品的质量要求：纯度；生物活性；比活性；蛋白质性质鉴定；杂质检测；稳定性；临床前的安全性和有效性评价；临床试验的安全性和有效性评价。 第九节 东西细胞产品的制造实例 一、类淋巴细胞干扰素IFN 生产工艺： 功能： 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 电穿孔法： 借助电穿孔仪的高压脉冲电场，使细胞膜出现瞬时可逆性小孔，外源DNA沿小孔进入细胞。转化率较高，拷贝数低。 BHK-21: 从5只无性别的生长1天的地鼠幼鼠肾脏中分离的;成纤维样细胞,核型为2n=44;培养基为DMEM加7%胎牛血清。用于增殖病毒，包括多瘤病毒、口蹄疫病毒、狂犬病毒等并制作疫苗，现已用于工程细胞构建。 四、常用生产用动物细胞的特性 CHO-K1：从中国地鼠卵巢中分 离的上皮样细胞。 核型： 2n=20～22。 培养基：DEME培养基 0.1mmol/L次黄嘌呤，0.1mmol/L胸苷， 10%小牛血清， 加入脯氨酸。 MRC-5： 从正常男性肺组织中获得的人二倍体细胞系。 核型为2n=46。 属成纤维细胞。 培养基用加小牛血清。 同工酶G6PD B型。 有限寿命42～46代。增殖速度较W1-38快，对不良环境敏感性较W1-38低。对人的病毒敏感。用于生产疫苗。 Namalwa： 从肯尼亚患有淋巴瘤病人获取，建成的人的类淋巴母细胞。2.8%的高倍体率，12～14条标记染色体。单条X，无Y。培养基为RPMI 1640，添加7%胎牛血清。用于生产α干扰素。 Sf-9： 1983年从亲代IPLB—SF21AE中克隆形成。亲代细胞从秋粘虫的蛹卵组织中分离获得。它对苜宿尺蠖核型多角体病毒和其它杆状病毒高度敏感。 通常用的培养基为Grace培养基，添加3.3g/L 水解乳蛋白和3.3g/L酵母浸液, 10%胎牛血清。用于高效表达外来蛋白制品。 Vero： 从正常成年非洲绿猴肾脏分离的。 为贴壁依赖的成纤维细胞，核型2n=60； 培养基为199培养基，加5%胎牛血清；用于增殖病毒，包括多瘤病毒、脊髓灰质炎、狂犬病毒。 W1-38：正常胚肺组织人二倍体细胞系。 核型为2n=46。成纤维细胞，能产生胶原，培养基用BME（Eagle’ Basal medium） 10%小牛血清，pH7.2, 同工酶为G6PD B型。 倍增时间为24h， 有限寿命50代。 安全，用于制备疫苗。 SP2/0-Ag14：通过融合的方法，从有羊抗红细胞活性的BALB/c 小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞系P3X63Ag8融合杂交瘤SP2/NL-Ag 亚克隆中分离获得， 能耐受8氮鸟嘌呤 20μg/ml但在含HAT 选择培养基中不能存活。通常用培养基为DMEM，添加10%胎牛血清。用于生产单抗杂交瘤细胞和抗体。 五、细胞库的建立 生产用的工