发酵工程第八章发酵设备与反应器分解.ppt

动物细胞培养的特点 （1）动物细胞是没有细胞壁的，受剪切力而破坏；而且大多数哺乳动物细胞需要附着在固体或半固体表面上才能生长； （2）动物细胞对培养基的营养要求相当苛刻，要求含有多种氨基酸、维生素、无机盐、血清等物料； （3）对培养环境条件十分敏感，对温度、pH值、溶氧浓度等条件都比微生物培养要严格得多。 （4）动物细胞的生长要比微生物细胞缓慢得多，一般只有在高细胞密度条件下，才能得到一定浓度的产物。 （5）由于动物细胞培养所需时间要比微生物细胞长，又非常容易染菌，因此需要有严格的防污染措施。 动物细胞培养技术 体外培养的动物细胞分为两种类型。一种是非贴壁依赖型细胞。另一种动物细胞为贴壁依赖型细胞，大多数动物细胞属于贴壁依赖型细胞。 （1）悬浮培养 悬浮培养过程中细胞以单细胞或细胞聚集体的形式悬浮于培养基中增殖，这与微生物发酵过程差别较小。 （2）贴壁培养 贴壁依赖型细胞在培养过程中黏附在固体吸附介质上。当细胞贴附于固体表面后，原来是圆形的细胞一经贴壁就迅速铺展，然后开始有丝分裂，并很快进入对数生长期，一般在数天后铺满生长表面，形成致密的细胞单层。 （3）微载体技术 细胞贴附于微载体上悬浮于培养基中，在微载体上逐渐生长成细胞单层，生长表面积较大，可实现细胞的高密度培养。并且由于细胞的生长环境均一，有利于对影响细胞的环境因素的检测与控制。 微载体技术使细胞培养过程的培养基利用率高，采样重复性高，细胞收获和下游加工过程方便，过程放大容易，劳动强度小，占用空间小。 影响微载体培养的因素有微载体浓度、细胞接种浓度和搅拌速度等。 植物细胞培养反应器 由于单个植物细胞具有整个植物的全部特性，其代谢过程能生成有很高药用价值的次生代谢物，植物细胞的大规模培养逐渐受到重视。但利用植物细胞培养的物质，一般仅限于那些难于化学合成无法用微生物合成和附加值很高的物质。 1 植物细胞培养的特点 ①植物细胞的大小约为 10～100μm，有纤维素细胞壁，细胞耐拉不耐扭，抵抗流体剪切力的能力较差； ②培养过程生长速度缓慢，如生长最快的烟草细胞的倍增时间为0.65天，而木本植物细胞的倍增时间高达2～10天，根、茎和叶分化的器官培养的倍增时间为10天以上； ③代谢产物不分泌到胞外而留在细胞内，因此要得到大量次级代谢产物须进行高密度培养； ④细胞在培养液中会形成多细胞聚集体，黏度较大，悬浮培养较困难，还会发生细胞在反应器壁黏附的情况； ⑤植物培养细胞易发生反分化，从而导致目的产物含量低于原植物体的含量。 植物细胞与组织的培养方法 植物细胞与组织的培养方法主要分为体外游离细胞培养和植物组织培养。 游离细胞培养：由植物组织挖块获取无菌细胞株，然后在固体培养基上筛选和培养愈伤组织，使其分散在液体培养基中振荡培养，形成单细胞或多细胞聚集体培养物。 植物组织培养也称为器官培养，也是由愈伤组织出发，然后在固体培养基上用生长素诱导愈伤组织分化形成器官，之后培养人工种子和种苗并进行种植与繁殖。 生物反应器中进行的植物细胞培养过程的方式与微生物发酵过程基本相同。 植物细胞反应器 1 悬浮培养反应器 植物细胞悬浮培养的基本型式是机械搅拌反应器，采用机械搅拌反应器可使物料混合均匀，也能完全满足细胞对反应器的供氧要求。 机械搅拌式反应器应用于植物细胞培养，存在的主要问题是机械搅拌引起的细胞剪切损伤，因此有许多研究者对搅拌式反应器做适当改进以适应植物细胞培养的要求。 气升式反应器的对细胞剪切小，气升式反应器也能够满足植物细胞的需氧的传质要求。 固定化植物细胞反应器 固定化技术能够克服细胞在培养过程中表现的不均一性、避免流体剪切力的作用和实现连续操作。 （l）填充床反应器 在反应器中，细胞位于支撑物表面，或包埋于支撑物中。培养基流经支撑物颗粒。优点:单位反应器体积的细胞容量较大。缺点：反应器流体混合效果差，过程参数难以控制，床层易被小颗粒物堵塞，流动阻力较大。 （2）流化床反应器 利用液体和气体使固定化细胞悬浮在反应介质中。优点是混合效果好，但流体的剪切力和固定化颗粒的碰撞常使支撑物破裂，而且流体力学条件复杂使放大困难。 光照生物反应器 微藻等光合微生物和光自养型植物 细胞的培养装置称为光照生物反应器。 光照培养时需要足够的光照，同时需要对培养系统供应大量的CO2和排出所产生的氧气。根据这种特点，光照生物反应器需配置复杂的光照系统和良好的传质条件，其混合条件应有利于细胞的悬浮和沿光照表面的充分混合。 微藻光合生物反应器 微藻大规模培养反应器有两类，一类是敞开式反应器；另一类是封闭式反应器。 敞开式反应器一般为占地面积较大的圆形浅水池，使用螺旋桨等搅拌器进行搅拌混合。 封闭式光照生物反应器是一种能使培养液接受光照的透明容器，其组成包括