60co辐照聚苯乙烯微孔板在抗-hcv elisa中的应用 application of 60co γ-ray irradiated polystyrene microplate for anti-hcv elisa.pdfVIP

第23 卷 第6 期 辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 Vol.23, No.6 2005 年12 月 J. Radiat. Res. Radiat. Process. December 2005 6 0 Co 辐照聚苯乙烯微孔板在抗−HCV ELISA 中的应用 1 1 1 2 冯 波 曾虹燕 唐裕芳 王 鲁 1 （湘潭大学食品与生物工程系 湘潭 411105 ） 2 （武汉大学生命科学院 武汉 430072 ） 60 摘要 为了探讨 Co γ 射线辐照对聚苯乙烯微孔板吸附小分子多肽的影响，建立了检测抗−丙型肝炎病毒 （Hepatitis C virus ，HCV ）的间接酶联免疫法（Enzyme−linked immunosorbent assay，ELISA ）。分别用未经辐 照处理、紫外线（Ultraviolet ray ，UV ）辐照处理和60 Co 辐照处理的微孔板吸附重组HCV 抗原，再配以辣根 过氧化物酶标记的羊抗人 IgG ，考察其灵敏度、特异性、均一性和稳定性等相关指标。实验结果表明，经 8 kGy60Co 辐照处理的聚苯乙烯微孔板可改善酶联免疫法的测定效果，检测灵敏度和均一性均有所提高。 关键词 酶联免疫法，60 Co γ射线，小分子多肽，重组丙型肝炎病毒抗原 中图分类号 R392.11 酶联免疫法（Enzyme−linked immunosorbent （Bovine serum albumin ，BSA ）、小牛血清 assay，ELISA ）是应用于免疫学技术测定标本中的 （New-born bovine serum ，NBS ），为上海赛达生物 微量物质测定方法，在临床检验中，主要通过抗原 药业有限公司产品；聚苯乙烯微孔板购自厦门宏达 抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。该方法 塑料制品厂；HCV 抗体阴、阳性标准血清盘（Panel ）， [1−2] 。聚苯乙烯微孔 购自卫生部药品生物制品检定所。 已成为医学检验的一个常规方法 板包被质量的好坏，对ELISA 实验的灵敏度、特异 Clin Bio 128c 酶标仪、Bio Rad 洗板机、四甲基 性有较大影响；微孔板对提高包被蛋白/多肽的吸附 联苯胺（Tetramethylbenzidine，TMB ）显色剂，均系 能力、改善检测效果，是ELISA 技术的一个重要课 自制。先配制溶液 50 % 甲酸溶液（溶液 A ，加 题。大多数情况下，小分子多肽比大分子蛋白更难 0.05 %TMB ）和 0.75 % 醋酸钠溶液（溶液 B ，加入 被聚苯乙烯微孔板吸附[3] 。据文献[4−5]报道，微孔 0.04 %水醋酸与30 %双氧水），使用前等体积混合溶 板经UV 辐照后能显著提高其对大分子蛋白的吸附 液A 和溶液B ，即成TMB 显色剂。 性，但还未见60 Co γ辐照对其吸附小分子多肽产生 1.2 方法 影响的报道。本工作以重组 HCV 抗原（小分子多 1.2.1 微孔板的 UV 辐照处理 按李晨旭等[4]报道 肽片段）为实验对象，对UV 辐照处理及60 Co γ射 的最优条，将微孔板置于紫外灭菌灯（波长254 nm ， 线辐照处理的聚苯乙烯微孔板对小分子多肽的吸附