HIF-2及ABCG2在人乳腺癌细胞微球体细胞中的表达 - 第三军医大学学报.DOC

HIF-2α、ABCG2在人乳腺癌细胞微球体中的表达 范原铭12 吴诚义1 屈洪波1 1重庆医科大学附属第一医院内分泌乳腺外科，重庆 400016 2重庆市长寿区人民医院外一科，重庆 长寿，401220HIF-2α与ABCG2在人乳腺癌细胞微球体（mammospheres，MSs）中的表达。方法 用western blot检测HIF-2α及ABCG2在MSs中的表达水平。结果 HIF-2α与ABCG2在MSs中的表达较人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231HIF-2α与ABCG2高表达，推测其较一般乳腺癌细胞具有更强的化疗耐药及血管增殖能力。 关键词：HIF ABCG2 乳腺癌 western blot The expressions of HIF-2α and ABCG2 in the mammospheres Fan Yuanming1,2 Wu Chengyi1 Gu Min3 Qu Hongbo1 1 Department of Endocrine Breast Surgery, First Affiliated Hospital, Chongqing Medical University, Chongqing, 400016, China 2 Department of Surgery, Changshou District People’s Hospital, Changshou, Chongqing, 401220, China 3 Department of Surgery, Changshou District hospital of traditional Chinese Medicine, Changshou, Chongqing, 401220, China Abstract Objective: To discuss the expressions of HIF-2α and ABCG2 in the mammospheres(MSs). Methods: The expressions of HIF-2α and ABCG2 in the MSs were tested by western blot. Results: The levels of HIF-2α and ABCG2’s expressions were higher than the MCF-7 and MDA-MB-231 groups, but the expressions of HIF-2α and ABCG2 in MSs dropped after the subculture. Conclusions: We can speculate that MSs has more strong chemotherapy drug resistance and the vascular appreciation ability. Key words: HIF, ABCG2, breast cancer, western blot 目前包括乳腺癌在内的多种实体瘤肿瘤干细胞已得到分离。一般是采用流式细胞技术、磁性激活细胞分选法进行分选以及SP细胞富集技术分选纯化肿瘤干细胞。本课题拟通过无血清悬浮培养的方法获取含有肿瘤干细胞的乳腺癌细胞微球体（mammospheres，MSs），并利用免疫荧光与Western-blot技术检测其中缺氧诱导因子（Hypoxia inducible factor-2α,HIF-2α）及ABCG2 （ATP-binding cassette superfamily G 2）的表达情况，以期了解HIF-2α在富集肿瘤干细胞的过程中可能起到的调控机制。 材料与试剂1.1主要材料 DMEM-F12、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF），表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）、上皮特异性抗原EDA、红细胞裂解液、激光共聚焦显微镜（Leica TCS SP5）。琼脂糖（赛百思公司），PCR仪（Applied Biosystems公司），稳压DNA电泳仪（BioRad公司），凝胶成像仪（上海天能公司），SDS蛋白电泳仪（上海天能公司），蛋白转膜仪（上海天能公司），高速离心机（日立公司），Gilson移液器（吉尔森公司），本实验在重庆市神经病学重点实验室完成。 1. 2主要试剂HIF-2α鼠抗人及ABCG2兔抗人抗体（Santa Cruz公司，USA），HRP标记的羊抗鼠及羊抗兔IgG（鼎国生物公司） 实验方法 2.1 病例选择及标本收集 选择2011年4月至2011年