小鼠肾纤维化模型.pdfVIP

小鼠肾纤维化模型 肾积水(hydronephrosis)是指尿液从肾盂排出受阻，蓄积后肾内压力增高，肾盂肾盏扩张，肾实质 萎缩，导致肾功能减退。梗阻性肾病其主要的病理生理改变是肾积水、肾盂及肾小管压力升高、肾间 质水肿、炎性细胞浸润、肾间质内成纤维细胞增生、肾间质胶原蛋白聚集、肾间质增宽、肾小管萎缩， 最终导致肾间质纤维化和肾单位减少，引起肾功能衰竭。 单侧输尿管梗阻是比较成熟的肾间质纤维化模型，结扎2 周就可有成纤维细胞的增生和间质细胞 外基质的生成。但是由于输尿管的结扎使患侧肾盂中的尿液不能外排，加上对侧肾脏的代偿作用，所 以一般情况模型组血肌酐、尿素氮、NAG 以及24h 尿蛋白仅明显高于正常组，但还处于正常范围之 内，同时对侧肾一般也无明显改变，而患侧肾脏组织中大量炎症细胞浸润、肾小管和间质的结构严重 破坏以及肾间质纤维化，最后肾间质呈现广泛的纤维化，而肾小球几乎没有病变。因此单侧输尿管梗 阻模型在研究肾间质纤维化方面使研究的靶点明确，有利于其病变机理及抗间质纤维化治疗的研究。 1.实验动物 SPF 级Balb/C 小鼠，健康，雄性，4~6W ，体重为18g~20g 2.实验分组 实验随机分组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组，每组15 只动物。 3.实验周期 7d ，14d，21d ，28d 4.建模方法 1. 小鼠3%戊巴比妥钠80mg/kg 腹腔麻醉后侧卧，左侧背部脱毛 2. 在大腿上方脊椎左侧 1cm 处开口，剪开皮肤及肌肉， 3. 分离出左侧输尿管，在其上1/3 处游离输尿管，6 号线结扎2 道，在其间剪断输尿管，清理伤口后 分两层缝合，待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察小鼠状态及死亡情况并 做好记录。 4. 在模型建立后7d ，14d，21d ，28d 分别处死小鼠，取左侧部分肾组织于4%多聚甲醛溶液固定，石 蜡包埋；其余肾组织液氮冷冻，-80 度保存。 5.模型的评价 1. 蛋白尿含量、尿NAG 活性测定 模型组术后2 周、4 周的24h 尿蛋白含量以及尿酶NAG 活性比 正常组和假手术组明显上升。 2. 血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量测定 手术4 周后，模型组血清Scr 和BUN 含量相对于正常组 和假手术组有稳定的升高。 3. 形态学观察：术后取左肾于4%多聚甲醛固定，依次脱水、透明、石蜡包埋、切片。做HE 染色及 Masson 染色，光镜观察肾小球、肾小管-间质的病理变化及炎性细胞浸润情况。可见模型组小鼠的肾 间质出现炎症细胞浸润，肾小管上皮细胞萎缩、刷状缘消失、肾小管管腔扩张呈囊状，管腔塌陷，间 质明显增宽，间质内可见大量炎性细胞浸润，伴有较多的成纤维细胞增生。并随时间的延长炎症细胞 浸润加重，小管上皮细胞扁平、脱落，肾小管萎缩、扩张加重，甚至塌陷、消失，胶原纤维增生，间 质纤维化加重 。 6.注意事项 1 分离输尿管时注意不要损伤肾脏。 2 注意清理伤口，防止感染。 3.取下肾脏后要剥离肾表面的结缔组织薄膜。 图1 肾脏大体图（左边为未结扎侧肾，右边为输尿管结扎侧肾，肾实质已发生严重萎缩） 图2 正常小鼠。肾小球、 肾小管及肾间质结构正常(HE 染色) 图3 肾纤维化小鼠。肾小管管腔扩张呈囊状，管腔塌陷，间质明显增宽，纤维化显著，间质内 可见大量炎性细胞浸润(HE 染色) 武汉云克隆诊断试剂研究所