小鹅瘟病毒分离与初步鉴定.docxVIP

小鹅瘟病毒分离与初步鉴定胡桂学高光邹啸环肖峰摘要:取死于具有小鹅瘟典型症状的7日龄吉林白鹅脾脏，制成乳剂，接种于未免疫小鹅瘟疫苗的健康母鹅所产种蛋的12日龄鹅胚尿囊腔。结果当盲传至第3代，鹅胚死亡，电镜负染尿囊液观察到细小病毒样粒子。雏鹅接种实验结果表明，试验组雏鹅表现出小鹅瘟临床症状和剖检特征。由此证明，该雏鹅死于小鹅瘟。关键词：小鹅瘟；细小病毒；分离鉴定Isolation and Primary Identification of Goose Parvovirus of Gosling PlaqueAbstract:With 12-days goose embryo produced by healthy geese, a strain of virus was isolated from the spleen of 7-days old gosling died from gosling plaque. It was parvolike virus observed clinic signs of gosling plague. The result showed that the isolatedvirus was goose parvovirus.Key words: gosling plaque; goose parvovirus; isolation and identification小鹅瘟是由鹅细小病毒引起的4～20日龄雏鹅的急性败血性传染病，传播速度快，死亡率高，对养鹅业危害极大。2001年5月，吉林省大安市某养鹅场7日龄吉林白鹅大批死亡。笔者对送检雏鹅进行了病毒分离，初步鉴定为细小病毒感染。动物回归实验表明，该分离病毒对易感雏鹅的致病性强，现将结果报道如下。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 病料为2001年5月吉林省大安市送检的7日龄吉林白鹅。主诉：雏鹅及母鹅未接种过小鹅瘟疫苗或免疫血清。雏鹅死前腹泻严重，粪便呈绿色，频死期角弓反张。剖检见小肠内有栓子，切面轮层状。无菌操作取另一只具有同样症状的雏鹅肝、脾于无菌平皿内。1.1.2 鹅胚购自长春某孵化场，种鹅未免疫小鹅瘟疫苗。选取12日龄鹅胚用于病毒分离。1.1.3 雏鹅购自长春某小鹅瘟清净场，4日龄。种鹅和雏鹅未免疫小鹅瘟疫苗或高免血清。1.2 方法1.2.1 病料处理与鹅胚接种将病料于无菌平皿内剪碎，十字匀浆器研磨，用无菌生理盐水（内含青、链霉素各1万IU/ml）制成10倍乳剂，5000r/min离心10min，上清液置于4℃冰箱过夜。次日接种于12日龄鹅胚尿囊腔，0.2ml/胚，37℃继续孵化5d，每天照蛋，弃去24h内死亡鹅胚，及时收取24～120h死亡鹅胚放于4℃冰箱。1.2.2 尿囊液收取与剖检常规方法收取尿囊液。注意观察鹅胚头、四肢和内脏病理解剖变化。1.2.3 病毒传代将尿囊液离心，取上清以灭菌生理盐水做50倍稀释，同1.2.1法接种鹅胚，盲传5代。1.2.4 电镜负染观察取出现病变鹅胚尿囊液，1000r/min离心10min，上清液置于铜网上，2%磷钨酸负染1～2min，于JME-100EA Ⅲ(日本)透射电镜观察并照相。1.2.5 雏鹅接种试验取20只4日龄雏鹅，随机分成试验组和对照组，每组10只，隔离饲养。试验组雏鹅皮下接种病变鹅胚尿囊液，1ml/只。对照组雏鹅皮下接种无菌生理盐水，1ml/只。逐日观察接种鹅临床症状，及时剖检死鹅，观察剖检变化。2 结果2.1 病毒分离结果盲传至第3代，鹅胚对于72～96h死亡。剖检鹅胚，见绒毛尿囊膜水肿，胚体翼和爪末端有明显的出血点，胚头、眼两侧充血严重，喙部有点状出血。心肌苍白，胚肝有坏死灶。2.2 电镜负染观察结果由电镜负染照片可见，病毒粒子直径约20nm，呈多角形，无囊膜，具有典型的细小病毒特征。2.3 雏鹅接种试验结果雏鹅接种试验结果见表1。表1 雏鹅接种试验结果Table 1. Inoculation results of gosling组别接种后天数/d 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10试验 10/10 10/10 7/10 5/10 5/10 3/10 2/10 2/10 1/10 1/10对照 10/10 9/10 9/10 9/10 9/10 9/10 9/10 9/10 9/10 9/10注：表中数据为存活只数/接种只数由表1可见，试验组雏鹅于接种后第2d开始死亡，第4～10d死亡逐渐增多，1只耐过。对照组于接种后第2d死亡1只，为鹅笼网夹死，剖检无明