布鲁菌半胱氨酸水解酶在甲硫氨酸循环中的催化 - 南京农业大学学报.pdfVIP

－ 　 南京农业大学学报　 ２０１７ꎬ４０(４):６９７ ７０２ ｈｔｔｐ:/ / ｎａｕｘｂ.ｎｊａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ 　 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ＤＯＩ:１０.７６８５/ ｊｎａｕ.２０１６０８０２１ － 徐达ꎬ吴小卡ꎬ荆雅玮ꎬ等. 布鲁菌半胱氨酸水解酶在甲硫氨酸循环中的催化活性研究[Ｊ]. 南京农业大学学报ꎬ２０１７ꎬ４０(４):６９７ ７０２. 布鲁菌半胱氨酸水解酶在甲硫氨酸循环中的催化活性研究 １ꎬ２ １ １ １ １ １ １ ２ꎬ３∗ １∗ 徐达 ꎬ吴小卡 ꎬ荆雅玮 ꎬ左佳坤 ꎬ米荣升 ꎬ黄燕 ꎬ陈兆国 ꎬ王成明 ꎬ韩先干 (１.中国农业科学院上海兽医研究所ꎬ上海 ２００２４１ꎻ２.扬州大学兽医学院ꎬ江苏 扬州 ２２５００９ꎻ － ３.奥本大学兽医学院ꎬ美国阿拉巴马州 ３６８４９ ５５１９) － 摘要:[目的]细菌的ｓａｈＨ基因编码Ｓ 腺苷同型半胱氨酸水解酶(ＳａｈＨ)ꎬ该酶参与细菌的甲硫氨酸循环(ＡＭＣ)ꎬ调控细菌的 多种生理功能ꎮ [方法]通过构建重组表达质粒ｐＥＴ２８ａ￣Ｂｒｕ￣ｓａｈＨ和ｐＥＴ２８ａ￣Ｐｓｅ￣ｓａｈＨꎬ分别表达布鲁菌(Ｂｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ)Ｓ２３０８ 株和铜绿假单胞菌(Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ)ＰＡＯ１株的ＳａｈＨ 重组蛋白Ｂｒｕ￣ＳａｈＨ 和 Ｐｓｅ￣ＳａｈＨꎮ 将纯化后的 Ｂｒｕ￣ＳａｈＨ、 Ｐｓｅ￣ＳａｈＨ以及我们前期表达纯化的禽致病性大肠杆菌(ａｖｉａｎ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉꎬＡＰＥＣ)的Ｐｆｓ和ＬｕｘＳ蛋白ꎬ分别在体 － 外催化Ｓ 腺苷同型半胱氨酸(ＳＡＨ)ꎬ通过对产物同型半胱氨酸(ＨＣＹ)的浓度测定ꎬ评价不同重组蛋白的催化活性ꎬ并对催化 －１ 底物时产生的自诱导分子２(ＡＩ￣２)活性进行检测ꎮ [结果]Ｂｒｕ￣ＳａｈＨ和Ｐｓｅ￣ＳａｈＨ分别催化 １ｍｍｏｌＬ ＳＡＨ生成３８和４７ －１ －１ μｍｏｌＬ ＨＣＹꎬ而ＡＰＥＣ的Ｐｆｓ和ＬｕｘＳ蛋白能催化相同浓度的ＳＡＨ产生４０１μｍｏｌＬ ＨＣＹꎮ 运用哈维弧菌ＢＢ１７０检测上述 底物的ＡＩ￣２活性ꎬ结果表明只有同时采用ＡＥＰＣ的Ｐｆｓ和ＬｕｘＳ蛋白催化ＳＡＨꎬ才能形成有活性的ＡＩ￣２分子ꎬ而Ｂｒｕ￣ＳａｈＨ和 Ｐｃｅ￣ＳａｈＨ均不能催化ＳＡＨ形成活性ＡＩ￣２分子ꎮ [结论]Ｂｒｕ￣ＳａｈＨ能催化ＳＡＨ生成ＨＣＹꎬ为进一步研究ｓａｈＨ在布鲁菌感染过 程中的作用提供依据ꎮ － 关键词:布鲁菌ꎻ甲硫氨酸循环ꎻＳ 腺苷同型半胱氨酸水解酶ꎻ催化活性ꎻ信号分子ＡＩ￣２