研究进展-20071109-bt863计划(2006aa10a212)-福建农 - yzxzcom.docVIP

研究进展Bt863计划(2006AA10A212)-福建农科院 承担任务 研发出藕合型20%伴胞晶体水分散性颗粒剂生物农药，申报或获得农药临时或品种登记1-2项； 2、申请国家专利1-2项； 3、发表论文7-10篇；培养博士生2名，培养硕士生7名。 二、年度进展任务 　　Bt蛋白特性研究、偶联剂选择 三、年度研究进展 （一）Bt蛋白特性研究 　　主要研究了Bt芽孢、伴孢晶体的分离与提纯，以及Bt杀虫蛋白肠溶性微胶囊的研究。观察了Bt杀虫蛋白的抗紫外能力及肠溶微胶囊对它的保护作用。 1、Bt伴孢晶体的絮凝提取 主要研究从Bt发酵液中絮凝杀虫物质，以达到浓缩目的的方法。研究结果表明壳聚糖可实现Bt杀虫物质的絮凝。壳聚糖絮凝蛋白质过程复杂，溶液PH值不同，蛋白质带电性质不同，壳聚糖带正电，蛋白质带负电，两者结合形成复合体，沉淀下来，当溶液PH值接近等电点时，带电荷数变少，相对与之结合的壳聚糖浓度增加，故而絮凝效果较好，本试验结果表明在PH5.5絮凝效果较好，这与Bt蛋白质等电点在5.5左右相一致。絮凝效果还受温度影响。本试验在30-35℃絮凝率较好，在40℃降低，而透射率却升高，可能是因为絮凝过程中夹杂有菌体的絮凝有关，因此最佳絮凝Bt蛋白质温度为30-35℃，且在此温度下Bt蛋白质活性不会被破坏。壳聚糖絮凝Bt蛋白质最佳浓度从实验可以得到在025g/L效果较好，浓度过低不够与蛋白质颗粒相结合，过高则相互竞争，分子运动增加，不利于絮凝。搅拌使得壳聚糖与蛋白质混合均匀，更好的结合形成大颗粒物质，搅拌时间太短则溶液混合不均匀，搅拌过渡溶液形成乳状液稳定体系，不利于絮凝沉淀。本试验得到搅拌时间1-10分钟较好，其中时间为5分钟、搅拌速度为中速效果最佳。阿维菌素衍生化研究。 查看了双水相萃取技术的国内外研究进展，设计了利用双水相萃取技术分离、提纯Bt伴孢晶体技术路线，并正在进行这方面的试验。 图1 透射率随PH值变化图 图2 值随PH值变化图 图3 透射率随温度变化图 图4 值随温度变化图 HPMCP膜材的微胶囊 丙烯酸树脂膜材的微胶囊 Bt杀虫蛋白的抗紫外能力及肠溶微胶囊的保护作用 在室内条件下，采用浸叶法处理甘兰叶，并用紫外灯进行紫外辐射处理叶上的Bt杀虫蛋白制剂，而后进行生物测定。结果表明肠溶性微胶囊对Bt杀虫蛋白有着明显的作用。 （二）偶联剂的选择 分别对阿维菌素的C5-OH和C4-OH进行衍生化处理，观察了在EDC[1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐]、sulfo-NHS（N-羟基硫代琥珀酰亚胺）、CMC（1-环己基-3-(2-吗啉基乙烷)碳化二亚胺）、N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）、DSP（二硫对琥珀酰亚胺基丙酸）等偶联剂反应下的收率及生物活性，最终选择NHS和EDC?HCl的混合物（混合比例1:1.5）为偶联剂。