互补多酶解法在蛋白质c末端质谱检测中的应用 - 分析化学.pdf

( ) 第 39 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 研究报告 第 4 期 2011 年 4 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 486~490 : / DOI 10.3724SP.J.1096.2011.00486 互补多酶解法在蛋白质 末端质谱检测中的应用 C 1 2 3 3 3 杨 洁 姚树森 赵永强 薛 燕 李 萍* 1 ( , ) 解放军总医院药品保障中心 北京 100853 2 ( , ) 3 ( , ) 解放军疾病预防控制中心办公室 北京 100850 国家生物医学分析中心 北京 100850 。 , 摘 要 建立了互补型多酶解法与串联质谱联用鉴定蛋白C 末端技术 在大量蛋白的实际检测中 根据蛋 、 、 。 白序列分别采用溴化氰 胰蛋白酶 谷氨酸内切酶和糜蛋白酶进行酶解或混合酶解 利用此技术对 8 个蛋白 ( , / , , , , 不同长度的C 末端肽段 分子量分布在 200~3000 Da 之间 目的肽段分别为m z272.20 788.45 796.48 944.58 , , ) , 1146.69 1151.67 1529.61 和2 147.04 进行 ESI MS/MS 检测 分别获得了 8 个不同长度的蛋白C 末端氨基酸序 - : 列 PR, SLSLSPGK, GNVTGMFA, LAC* GVIGIAQ, DHWPEANQVG, FIAWLVKGRG, GTLGIVC* PIC* SQKP 和 HEALHNHYTQKSLSLSPGK 。 ; ; 关键词 多酶解方法 电喷雾串联质谱技术 C 末端测序 引 言 1 、 蛋白质 C 末端序列测定的主要方法有化学法 酶切结合串联质谱法和溴化氰裂解结合串联质谱法 [1~3] 。 , , 。 等 化学法由于偶联试剂和裂解试剂的限制及操作繁琐 未取得大的突破 现在已基本不用 酶切 结合串联质谱法存在一定的序列依赖性,有时由于找不到合适的酶切位点而在串联分析时找不到待测 。