血浆脂蛋白测定.ppt

第十一章 血脂及血浆脂蛋白检验 第一节 概 述 第二节 血脂、血浆 脂蛋白测定 本章小结 一、血清外观分析（血清冷置试验） 混浊 （TG增高） 下层浊（VLDL增高）Ⅴ型 下层清（VLDL正常）Ⅰ型 均匀混浊 （VLDL↑） TC正常 Ⅳ型 上层奶油样 （CM↑） TC增高 Ⅱa型 TC正常 正常人 清亮 （TG正常） TC↑ Ⅱb，Ⅲ型 空腹 血清 测TC 4℃过夜 测TC 二、血清总胆固醇测定 胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重要的生理功能，如合成类固醇激素，维生素D3和胆汁酸，并构成细胞膜成分，TC包括FC（1/3）和CE（2/3），胆固醇与动脉粥样硬化有密切关系，故胆固醇测定是最常用的实验室检测项目之一。 TC测定方法很多，约200多种，分为化学法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法（决定性方法）。 （一）化学测定法 主要有两类 1.Liberman-Burchard反应 简称L-B反应，胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成3,5-胆烷二烯阳离子，然后被醋酐，浓硫酸氧化生成绿色的胆烷六烯磺酸。呈色稳定性差。 2.Zak反应 胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成3,5-胆烷二烯阳离子，然后在Fe3+存在下氧化生成紫红色胆烷四烯阳离子，灵敏度较L-B反应高7倍，且呈色稳定性好，但试剂腐蚀性极大，不能用于自动化分析。 （二）酶法 胆固醇酯 胆固醇 ＋ 脂肪酸 胆固醇 ＋ O2 胆烷-4-烯-3酮 ＋H2O2 H2O2 ＋ 4AAP ＋酚 红色亚胺醌 ＋ H2O CEH ChOD POD 试剂中除上述三种酶外，还有胆酸钠和表面活性剂及稳定剂，胆酸钠用于激活CEH，表面活性剂促进胆固醇从脂蛋白中释放。 酶法操作简便，快速，试剂无腐蚀性，适合于自动化分析。 【参考范围】2.85～5.17mmol/L 【临床意义】血清TC含量受年龄、性别、饮食和运动等因素的影响。①20岁以上随年龄↑而↑，70岁以后则有下降趋势。②20～40岁阶段男性高于女性，但女性绝经后则高于男性。③城市人群高于农村人群，与饮食和运动有关。④脑力劳动者高于体力劳动者。 病理性高胆固醇血症 原发性高胆固醇血症，糖尿病、胆道阻塞、肾病综合症、甲状腺功能减退。 病理性低胆固醇血症 严重贫血、甲亢、营养不良。 【方法评价】 1. 线性范围 可达19.38 mmol/L（750mg/dl）。 2. 变异系数 批内CV＜1.5%，批间CV ≤2.5%。 3. 特异性 特异性好，灵敏度高，既可手工操作，也可自动化分析，既可用终点法检测，也可用速率法检测。 4. 还原性物质（胆红素、维生素C）增多时，可使结果出现负偏差。 三、血清甘油三脂测定 TG是由一分子甘油与三分子脂肪酸组成的化合物，主要存在于VLDL和CM中，临床化学中往往以测定甘油代表TG的含量。TG的测定方法很多，如气相色谱法、高效液相色谱法、红外分光光度法。但上述方法需特殊的仪器设备和技术，故一般只用于研究工作中。临床实验室主要用化学法和酶法。 （一）化学法 基本步骤可归纳为四步 1.抽提：甘油三脂的抽提是采用合适的溶剂，使脂蛋白变性将TG提取，同时去除干扰物质（磷脂、游离甘油、葡萄糖等）常用方法有： （1）异丙醇抽提，沸石合剂（沸石、高岭土）吸附。 （2）异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂。 （3）正壬烷、异丙醇、稀硫酸分溶抽提，免去吸附磷脂的操作，后用价廉的正庚烷代替正壬烷。应用较广。 2.皂化：甘油三脂的水解 一般都采用KOH乙醇或KOH异丙醇溶液，60℃，5～15min可使TG完全水解。 3.氧化：甘油的氧化 最常用的氧化剂是HIO4，甘油在酸性条件下被氧化成甲醛、甲酸。反应受α-磷酸甘油、葡萄糖、丝氨酸的干扰，故抽提时应尽量除去此类物质的干扰。 4.显色：显色测定甲醛。常用方法有： （1）甲醛与变色酸（4,5-二羟-2,7-萘二磺酸）在硫酸溶液中加热生成紫红色化合物。（570nm） （2）甲醛与乙酰丙酮在氨的存在下缩合成黄色的3,5-二乙酰-1,4-二