菊花b 病毒外壳蛋白互作蛋白的筛选 - 南京农业大学学报.pdf

摇 南京农业大学学报摇 2013,36(4):43-48 http:/ / 摇 Journal of NanjingAgricultural University doi:10.7685/ j.issn.1000-2030.2013.04.008 試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試 楼望淮,蒋甲福,陈素梅,等.菊花B病毒外壳蛋白互作蛋白的筛选[J].南京农业大学学报,2013,36(4):43-48 菊花B病毒外壳蛋白互作蛋白的筛选 * 楼望淮,蒋甲福,陈素梅,房伟民,陈发棣 ,管志勇,廖园 (南京农业大学园艺学院,江苏 南京210095) 摘要:采用PCR扩增菊花B病毒(CVB)外壳蛋白基因的开放阅读框,构建酵母双杂交系统所需的诱饵表达载体pGBKT7鄄 CVBCP,测序验证后转化Y2HGold酵母菌。 将酵母菌Y187/ pGADT7鄄cDNA与酵母菌Y2HGold/ pGBKT7鄄CVBCP进行交配转 化,在SD/ 鄄Trp/ 鄄Leu/ 鄄His/ 鄄Ade/ X鄄琢鄄Gal平板上筛选蓝色阳性克隆并测序pGADT7鄄cDNA 的插入片段。 结果表明:诱饵载体 表达产物对酵母无毒性作用,且对报告基因无自激活作用。 筛选菊花cDNA文库初步得到了与CVB外壳蛋白相互作用的 E3泛素连接酶ARIADNE鄄like蛋白和ATP结合蛋白,为进一步研究CVB外壳蛋白与寄主的互作机制奠定了基础。 关键词:菊花;菊花B病毒;外壳蛋白;E3泛素连接酶;酵母双杂交 中图分类号:S682.3摇 摇 摇 摇 文献标志码:A摇 摇 摇 摇 文章编号:1000-2030(2013)04-0043-06 Screening of proteins interacting with the coat protein of Chrysanthemum virus B LOU Wanghuai,JIANGJiafu,CHE * N Sumei,FANG Weiming,CHEN Fadi ,GUAN Zhiyong,LIAO Yuan (College of Horticulture,Nanjing Agricultural University,Nanjing210095,China) Abstract:To find the protein in the chrysanthemum which was interactedwith Chrysanthemum virus B coat protein,this experiment used PCRtogettheORFoftheChrysanthemumvirusB coatproteingeneconstructedvectorpGBKT7鄄CVBCPasthebaitintheyeast two鄄hybrid system,verified by sequencing and transformed into yeast strain Y2HGold.The yeast Y187/ pGADT7鄄cDNA was mated with yeast Y2HGold/ pGBKT7鄄CVBCP,then SD/ 鄄Trp/ 鄄Leu/ 鄄His/ 鄄Ade/ X鄄琢鄄Gal plates were used for screening of blue鄄positive clones whosefragmentsinsertedinthepGADT7鄄cDNAweresequenced.Theexper