抑制igf2基因的sirna表达载体对肝癌huh-7细胞增殖的 - 中国药房.pdf

抑制IGF2基因的siRNA 表达载体对肝癌Huh-7细胞增殖的抑制 作用Δ 1＊ 2 2 2 3 2# 胡 卫 ，吴胜兰 ，王旷靖 ，张良鹏 ，潘兹书 ，汤绍辉 （1.武汉大学医院内科，武汉 430072；2. 暨南大学附属 第一医院消化内科，广州 510632；3.武汉大学生命科学院，武汉 430072） 中图分类号 R965；R979.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2015）22-3059-04 DOI 10.6039/j.issn. 1001-0408.2015.22.11 摘 要 目的：研究抑制人胰岛素样生长因子2（IGF2）基因的siRNA 表达载体对肝癌Huh-7细胞增殖的抑制作用。方法：将重组 人甲胎蛋白（hAFP ）和人端粒酶逆转录酶（hTERT ）双启动子调控抑制IGF2基因的siRNA 表达载体pGL3-hAFP-hTERT-siRNA3（简 称siRNA3）转染Huh-7细胞和正常肝L-02细胞，另设阴性对照（载体pGL3-hAFP-hTERT）组和空白对照组。采用实时荧光定量聚 合酶链反应法检测各组细胞转染48h 后IGF2mRNA 表达；酶标仪检测转染0、24、48、72h 后的细胞活性；流式细胞仪检测转染48 h 后细胞周期、细胞凋亡；Western blot 法检测细胞IGF2、增殖细胞核抗原（PCNA ）、细胞周期蛋白（Cyclin ）E2、Cyclin D2、Cdc2、 Bcl-2蛋白表达水平。结果：与阴性对照组和空白对照组比较，转染siRNA3的Huh-7细胞中IGF2mRNA 表达明显减弱，转染48、 72h 后Huh-7细胞活性明显降低，G 期Huh-7细胞明显增加，S 期Huh-7细胞明显减少；Huh-7细胞早期、晚期及总凋亡百分比均明 1 显增加，IGF2、PCNA 、Cyclin E2、Cyclin D2、Cdc2和Bcl-2蛋白表达均明显减弱，以上差异具有统计学意义（P ＜0.01或P ＜0.05）。 转染siRNA3表达载体的L-02细胞上述指标均无明显变化（P ＞0.05）。结论：重组hAFP 和hTERT 双启动子调控针对IGF2基因的 siRNA 可特异性抑制Huh-7细胞IGF2表达及细胞增殖，其可能与下调IGF2mRNA 及蛋白表达，进而引起细胞增殖相关基因PC- NA 、细胞周期调控相关基因Cyclin E2、Cyclin D2、Cdc2及细胞凋亡调控相关基因Bcl-2蛋白表达下调有关。 关键词 重组hAFP/hTERT 双启动子；RNA 干扰；人胰岛素样生长因子2基因；肝癌Huh-7细胞 Inhibitory Effect of siRNA Expression Vector Inhibiting IGF2 Gene on the Proliferation of Hepatoma Cell Line Huh-7 1 2 2 2 3 2 HU Wei ，WU Sheng-lan ，WANG Kuang-jing ，ZHANG Liang-peng ，PAN Zi-shu ，TANG Shao-hui （1.Dept. of Internal Medicine ，the Hospital of Wuhan University ，Wuhan 430072，China ；2.Dept. of Gastroenterology ，the First Affiliated Hospital of Jinan University ，Guangzhou 510632，China ；3.College of Life Sciences ，Wuhan Uni- versity ，Wuhan 430072，China ） ABSTRACT OBJECTIVE ：To investigate the inhibitory effect of siRNA expression vector inhibiting human insulin-like growth f