功能性包涵体的研究进展.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（１）：１１４１２１ 功能性包涵体的研究进展 １ ２ ２ ２ 罗　莉 　何勇智 　张勇侠 　王明蓉 （１中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所　成都　６１００５２　２成都生物制品研究所有限责任公司　成都　６１００２３） 摘要　利用原核系统表达外源重组蛋白的一个特点是表达蛋白多以包涵体形式存在。在过去人 们一直认为包涵体是错误折叠、无生物活性的蛋白，需要经过变复性的过程重新获得有生物活 性、可溶的蛋白，因而变复性条件的摸索迄今仍然是该领域的难点。但近几年的研究表明包涵体 并非都是无生物活性的，功能性包涵体（或者称为非传统意义包涵体）概念的提出是该领域的一 个重大研究进展。由于功能性包涵体本身具有生物活性，可在非变性条件下提取，目前已经在生 命科学的基础研究、生物制药、生物材料、生物催化等领域展现出良好的应用前景。重点从功能 性包涵体的定义、形成机理、提取条件等近期研究进展进行综述，以期为原核细胞表达和工业生 产重组蛋白药物提供新的思路。 关键词　功能性包涵体　非变性　生物活性 中图分类号　Ｑ８１６ 　　随着小分子抗体等非糖基化蛋白药物的迅猛发 　　在原核表达系统中，基因的转录和翻译是同步进 展，利用原核系统表达重组蛋白在制药工业中的应用 行的，即边转录边翻译。蛋白折叠理论认为核糖体上 变得越来越广泛，然而外源基因原核系统表达时目的 翻译形成的多肽链从线性结构到天然高级结构的折叠 蛋白多以包涵体形式存在。蛋白以包涵体形式表达有 过程中要经历一种中间体形式，因而翻译速率、折叠速 很多优点，如蛋白稳定、产量高、成本低、易纯化等，但 率就在很大程度上影响了蛋白的表达形式。当蛋白的 同时由于蛋白质理化性质的复杂性，要获得高收率的 翻译速率远大于折叠速率时就容易形成不稳定或者错 功能蛋白仍需要不断探索变复性及纯化工艺，因此在 误折叠的空间构象，这样的蛋白或者被蛋白酶识别后 一定程度上限制了表达体系在实际生产中尤其是蛋白 降解，或者形成稳定的、不易被降解的聚集体，即传统 ［１］ 类药物研发中的应用。２００５年 Ｓｉｍｏｎａ等 报道他们 意义上不溶的、无生物活性的的包涵体；而折叠正确的 从包涵体中不通过变性复性过程就提取出了有生物活 蛋白就以可溶性形式存在（见图１中１、２、３形式）。 ［２］ 性的ｈＧＣＳＦ蛋白，同年Ｅｌｅｎａ等 提出不是所有包涵 １．２　功能包涵体 ［３６］ 体都是无生物活性的，随后人们陆续 证实了这种功 ［７］ 　　１９８９年Ｗｏｒｒａｌｌ等 在 半乳糖苷酶的研究中，获 β 能性包涵体（或称非传统包涵体）的存在。由于功能性 得了具有生物活性的包涵体蛋白，首次提出包涵体蛋 包涵体本身具有生物活性，不需要经过复杂的变复性 ［８］ 白也含有一定正确的折叠结构。１９９１年Ｋｏｓｔａｓ等 也 过程就能获得，因此引起了学术界和工业领域研发者