sumo分子伴侣与富含二硫键的抗真菌肽drs 基因的融合有助于其 .pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（１２）：２２～２５ Ｓｕｍｏ分子伴侣与富含二硫键的抗真菌肽Ｄｒｓ 基因的融合有助于其可溶性表达 １ １ １ １ １ ２ １，３ 肖业臣　秦玉侠 　解佳森 　刘孝菊 　庞实锋 　杨婉莹 　李校 （１吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心　长春　１３０１１８） （２华南农业大学动物科学学院　广州　５１０６４２　３温州医学院药学院　温州　３２５０３５） 摘要　利用ＰＣＲ引物延伸的方法合成了分子伴侣Ｓｕｍｏ和抗真菌肽Ｄｒｏｓｏｍｙｃｉｎ的融合基因，将其 插入到表达载体ｐＥＴ３ｃ中，构建出重组表达质粒ｐＥＴ３ｃＳＤ，并转化至大肠杆茵ＢＬ２１（ＤＥ３）中。 ? ? ? 筛选重组转化子，进行表达条件的优化和表达产物的可溶性分析。结果表明在３０℃条件下，用 ０５ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导３ｈ后，目的蛋白表达量最高，约占菌体总蛋白的２２％，其中可溶性蛋白超过 了目的蛋白的８０％。经过ＮｉＮＴＡ纯化后，融合蛋白的纯度可达９５％以上。抑菌实验表明，该融 ? 合蛋白对白僵菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａｂａｓｓｉａｎａ）具有一定的抑真菌活性。证实了使用分子伴侣Ｓｕｍｏ融合表 达对具有多个二硫键的小分子多肽的表达是非常有效的。 关键词　抗真菌肽　Ｄｒｏｓｏｍｙｃｉｎ　Ｓｕｍｏ分子伴侣 中图分类号　Ｑ７８６ 　　真菌病在我国较为常见。近几年来，随着广谱抗 目前报道的抗菌肽类，除少数几种对真菌有抗性外，其 生素、糖皮质激素的大量使用、免疫抑制剂的广泛应 它绝大多数对丝状病原真菌（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓｆｕｎｇｉ）无明显 用，烧伤抢救、放射治疗和器官移植的广泛进行，许多 的抑杀作用。Ｄｒｏｓｏｍｙｃｉｎ是被发现对真菌具有广谱抗 原来不致病的和正常情况下治病性很弱的病原菌引起 性的抗真菌多肽，抗真菌活性较强［５］。 疾病，而且发病率逐年增加。目前，真菌感染已成为肿 　　Ｄｒｏｓｏｍｙｃｉｎ（Ｄｒｓ）是 黑 腹 果 蝇 （Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ 瘤患者、免疫缺陷患者的主要死亡原因之一，尤以医院 ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）免疫后体液中产生的一种抗真菌肽 内交叉感染最为明显［１，２］。 （ａｎｔｉｆｕｎｇａｌｐｅｐｔｉｄｅ）。实验发现，Ｄｒｓ对细菌无明显的生 　　目前临床上应用的抗真菌药物大都是通过破坏真 物学活性，但对多种丝状病原真菌显示出强烈的抗 ［６，７］ 菌的代谢途径或阻断大分子的生物合成来达到抗真菌 性 。而丝状病原真菌是造成植物真菌病害、动物和 效果，容易使病原真菌产生抗药性；同时也可能对宿主 人类真菌感染的主要病原，特别是在临床上，真菌耐药 ［３］ 性的产生和快速发展已成为真菌感染防治上一个日益 细胞产生一定的毒性 。由于真菌细胞与人体细胞都 属于真核细胞，所以开发新型的多肽类抗生素药物，可 严峻的问题。因此，Ｄｒｏｓｏｍｙｃｉｎ对于开发新的抗真菌药 能是彻底解决临床深部真菌病危害的有效途径。 物具有较好的应用前景。 ［８］ 　　国外方面，共有来自细菌、昆虫、蛙、猪和人体的１０ 　　国内杨婉莹等 在大肠杆菌系统中表达了Ｄｒｓ基 多种抗菌肽进入临床试验，用于皮肤感染、导管感染、 因，蛋白以非可溶性的包涵体形式存在，不仅影响了蛋 泌尿生殖系统感染、胃溃疡等局部或者全身感染性疾 白表达量和活性，而且增加了蛋白纯化步骤和成本