毛细管电泳检测肺癌及癌旁正常组织蛋白质混合物差异capillary .pdfVIP

2011 年第 69 卷 化 学 学 报 Vol. 69, 2011 第 5 期, 543～547 ACTA CHIMICA SINICA No. 5, 543～547 ·研究论文· 毛细管电泳检测肺癌及癌旁正常组织蛋白质混合物差异 刘 勇 a,b 王 荣*,a,b,c 高 岚 b 贾正平 a,b 谢 华 a 张军莉 a 马 骏 a 张爱梅 d 谢希晖 c (a 兰州军区兰州总医院临床药理基地 兰州 730050) (b 兰州大学生命科学学院 兰州 730000) (c 兰州大学药学院 兰州 730000) (d 西北师范大学生命科学学院 兰州 730070) 摘要 以建立的毛细管电 (CE)-激光诱导荧光(LIF)检测蛋白质的方法对提取肺癌及癌旁正常组织蛋白质混合物(变 性/活性)差异进行检测. 采用异硫氰酸荧光素(FITC)为衍生剂, 电泳缓冲液为 1×TBE (TBE 为 Tris-硼酸-EDTA, 变性电 pH 10.0, 活性电泳为 pH 8.3 且含有 2 mg/L 考马斯亮蓝), 分离电压 15 kV, 柱温 15 ℃ , 电动进样(10 kV ×10 s), 激发 波长/发射波长＝488/520 nm 检测时, 肺癌及癌旁正常组织蛋白质混合物样品得到较好分离且有明显差异. 与目前常用 蛋白分析方法: 变性 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电 (SDS) 以及活性蓝绿温和胶电 (BN)进行比较. BN 结果显示肺癌组织相比正常组织有较明显蛋白种类差异; SDS结果表明一些蛋白质表达量差异也是肺癌及癌旁 正常组织的显著差别, 且主要集中在 20～116 kDa. CE-LIF 检测结果与 PAGE 结果大致相同, 且 CE-LIF 检测蛋白质的 灵敏度高于 PAGE, 能更准确反映肺癌及癌旁正常组织的蛋白质差异. 结论是 CE-LIF 可用于蛋白质差异检测, 时间短, 效果较好, 对活性蛋白质进行分析体现了其优点: 可提供较强的动力——电压, 及强动力下良好的温度稳定性. 关键词 蛋白质组学; 毛细管电 ; 肺癌; 蛋白质混合物; 聚丙烯酰胺凝胶电 ; 蓝绿温和胶电 Capillary Electrophoresis Detection of Lung Cancer and Adjacent Normal Tissue Differences in Protein Mixture Liu, Yonga,b Wang, Rong*,a,b,c Gao, Lanb Jia, Zhengpinga,b Xie, Huaa Zhang, JunLia Ma, Juna Zhang, Aimeid Xie, Xihuic