苏丹红i－人血清白蛋白荧光共振能量转移研究及应用.pdfVIP

《化学通报》在线预览版 苏丹红 I －人血清白蛋白荧光共振能量转移研究及应用 杨胜园 吕昌银∗ 杨慧仙 于军晖 ( 南华大学公共卫生学院卫生化学检验学教研室 衡阳 421001) 摘要 在 25 ℃、pH 8.2 的 Tris-HCl 缓冲液中，苏丹红 I 与人血清白蛋白（HSA ）之间能产生有效的非辐射能量转移，苏丹 红 I 的加入使 HSA 的荧光猝灭。在此基础上，建立了通过人血清白蛋白共振能量转移荧光猝灭测定苏丹红 I 的方法，其方 法线性范围为：0.5～7.5µg/mL，检出限为 0.1µg/mL, RSD= 0.7%～1. 8%，加标回收率为 91.9%～109.3%。 关键词：共振能量转移 苏丹红 I 人血清白蛋白 荧光猝灭 Fluorescence Resonance Energy Transfer Quenching Method for Determination of Sudan I with Human Serum Albumin Yang Shengyuan , LÜ Changyin *, Yang Huixian, Yu Junhui (Department of Health Laboratory Technology in the School of Public Health，Nanhua University, Hengyang, 421001) Abstract It was found that the effective energy transfer could occur between Sudan I and Human Serum Albumin (HSA) in Tris-HCl buffer solution at pH 8.2, which quenched the fluorescence intensity of HSA. The fluorescence quenching intensity of HSA at 337nm was proportional to the concentration of Sudan I. The linear range of the calibration curve was 0.5~7.5µg/mL. The detection limit was 0.1µg/mL, the RSD =0.7%~1.8% and the recovery was 91.9%～109.3%. Keywords Resonance energy transfer, Sudan I, Human Serum Albumin, Fluorescence quenching 荧光共振能量转移（FRET ），也称为非辐射能量转移，它是指电子激发能在适当的能量给体（D ）和 能量受体（A ）对之间传递，传递距离最大可达7.0～10.0 nm。D 与 A 之间能量转移的效率与 D 的发射光 谱和 A 的吸收光谱重叠的程度以及 D 与 A 之间的距离密切相关[1] 。该技术自 20 世纪 40 年代末提出以来 以成功应用于蛋白质结构、免疫分析、糖类测定、生物医学、临床检验、无机离子、有机物、高分子和超 分子科学等领域的研究。这种技术具有能避免散射光的影响、灵敏度高、比常规荧光法和共振光散射法的 抗干扰能力强、重现性好等特点[2] 。本文研究苏丹红I －人血清白蛋白共振能量转移的条件及影响因素，并 利用共振能量转移技术建立了苏丹红 I 的检测方法。该方法简便快速，抗干扰能力强，重现性好，已成功 应用于实际样品的分析。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 Hitachi F-4500 荧光分光光度计( 日本日立，测定条件：光电倍增管负电压 400V ；扫描速度 240 nm/min ； 激发和发射单色器狭缝宽度均为 5nm) ；UV-8500 紫外/可见分光光度计(上海天美科学仪器有限公司) ； PB-20(PB-S)标准酸度计(